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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取动物组织RNA时的处理
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ljapril

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取动物组织RNA时的处理

我要从小鼠脑部的海马提取RNA，现在组织已经有了，放在1.5ml的EP管中，只有一点点，提取RNA时需要充分研磨破碎，我们这里只有细胞超生破碎仪，那么我这种情况可以用吗?
一是超生破碎放热，会影响RNA吗？
二是探头该怎么处理啊？用DEPC水冲洗？会不会很容易污染样品？
三是大概要破碎多久呢？设定的参数最好是多少啊？怎么判断破碎充分了呢？
问题有点多，谢谢大家了！
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1楼 2012-05-16 22:46:26
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karin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-17 14:45:14
ljapril: 金币+1 2012-07-19 10:25:21
没有用超声破碎过动物组织，破碎过大肠杆菌。不清楚用超声能不能破碎，应该用液氮研磨比较好。要是可以用超声的话，可以把ep管放在冰上。与组织接触的仪器部分都要认真处理吧，要不会是RNA降解的。
祝好运啊！
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坚持就是胜利
2楼2012-05-17 08:43:48
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-17 14:45:25
ljapril: 金币+2 2012-07-19 10:25:33
脑部？应该是很容易裂解的组织。加入Trizol后用枪反复吸打多次即可裂解。可见组织均匀分散在Trizol里即已裂解，也可在吹散后静置上5-10min确保裂解。
超声也不是不可以，但相对来说麻烦。且超声放热多少对RNA有些影响。且如是接触式的探头，容易引入污染。
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伟大航线....
3楼2012-05-17 09:01:13
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ljapril

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by karin at 2012-05-17 08:43:48:
没有用超声破碎过动物组织，破碎过大肠杆菌。不清楚用超声能不能破碎，应该用液氮研磨比较好。要是可以用超声的话，可以把ep管放在冰上。与组织接触的仪器部分都要认真处理吧，要不会是RNA降解的。
祝好运啊！

1.5的EP管怎么放液氮进去啊？组织就那么一点点，也不好取出来啊
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4楼2012-05-17 11:50:42
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ljapril

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by longrna at 2012-05-17 09:01:13:
脑部？应该是很容易裂解的组织。加入Trizol后用枪反复吸打多次即可裂解。可见组织均匀分散在Trizol里即已裂解，也可在吹散后静置上5-10min确保裂解。
超声也不是不可以，但相对来说麻烦。且超声放热多少对RNA有些 ...

用枪吹打害怕裂解的不够充分，那样不是就不好提取RNA了吗？哎，现在还纠结啊
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5楼2012-05-17 11:52:59
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
液氮
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
6楼2012-05-17 14:37:27
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karin

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ljapril at 2012-05-17 11:50:42:
1.5的EP管怎么放液氮进去啊？组织就那么一点点，也不好取出来啊

我以前也用1.5的ep管，就有镊子夹着管子伸到液氮里，把液氮灌点在管子里，立即研磨的。我提的昆虫组织的，用专门的小研磨棒。
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坚持就是胜利
7楼2012-05-17 15:05:46
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助，欢迎交流 2012-05-24 13:45:09
ljapril: 金币+2 2012-07-19 10:25:54
引用回帖:
5楼: Originally posted by ljapril at 2012-05-17 11:52:59:
用枪吹打害怕裂解的不够充分，那样不是就不好提取RNA了吗？哎，现在还纠结啊

裂解细胞膜不是靠吹打，是靠化学试剂（Trizol里的酚）。吹打只是把大团组织块吹散以便裂解。所以大可不必担心。
另外，那么少的组织如果用研磨损失的估计比剩余的还多。
另外axygen有一种叫做研磨棒的东西，与进口1.5ml离心管配合使用也可进行“研磨”操作。个人经验如果是易散易吹打的组织（如脑）还不如直接吹打。
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伟大航线....
8楼2012-05-17 15:49:15
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ljapril

新虫 (初入文坛)
西瓜: 回帖置顶 2012-05-24 09:02:17
引用回帖:
3楼: Originally posted by longrna at 2012-05-17 09:01:13:
脑部？应该是很容易裂解的组织。加入Trizol后用枪反复吸打多次即可裂解。可见组织均匀分散在Trizol里即已裂解，也可在吹散后静置上5-10min确保裂解。
超声也不是不可以，但相对来说麻烦。且超声放热多少对RNA有些影

脑部的组织其实并不容易裂解哦，大概有些特殊的物质吧，容易裂解的是肝脏组织，很容易就分散了。
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9楼2012-05-23 23:53:31
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ljapril

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by karin at 2012-05-17 15:05:46:
我以前也用1.5的ep管，就有镊子夹着管子伸到液氮里，把液氮灌点在管子里，立即研磨的。我提的昆虫组织的，用专门的小研磨棒。

我试了用加液氮研磨，发现组织变得好硬，不好磨啊
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10楼2012-05-23 23:54:38
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