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ljapril

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取动物组织RNA时的处理

我要从小鼠脑部的海马提取RNA,现在组织已经有了,放在1.5ml的EP管中,只有一点点,提取RNA时需要充分研磨破碎,我们这里只有细胞超生破碎仪,那么我这种情况可以用吗?
一是超生破碎放热,会影响RNA吗?
二是探头该怎么处理啊?用DEPC水冲洗?会不会很容易污染样品?
三是大概要破碎多久呢?设定的参数最好是多少啊?怎么判断破碎充分了呢?
问题有点多,谢谢大家了!
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ljapril

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by karin at 2012-05-17 15:05:46:
我以前也用1.5的ep管,就有镊子夹着管子伸到液氮里,把液氮灌点在管子里,立即研磨的。我提的昆虫组织的,用专门的小研磨棒。

我试了用加液氮研磨,发现组织变得好硬,不好磨啊
10楼2012-05-23 23:54:38
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karin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-17 14:45:14
ljapril: 金币+1 2012-07-19 10:25:21
没有用超声破碎过动物组织,破碎过大肠杆菌。不清楚用超声能不能破碎,应该用液氮研磨比较好。要是可以用超声的话,可以把ep管放在冰上。与组织接触的仪器部分都要认真处理吧,要不会是RNA降解的。
祝好运啊!
坚持就是胜利
2楼2012-05-17 08:43:48
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-17 14:45:25
ljapril: 金币+2 2012-07-19 10:25:33
脑部?应该是很容易裂解的组织。加入Trizol后用枪反复吸打多次即可裂解。可见组织均匀分散在Trizol里即已裂解,也可在吹散后静置上5-10min确保裂解。
超声也不是不可以,但相对来说麻烦。且超声放热多少对RNA有些影响。且如是接触式的探头,容易引入污染。
伟大航线....
3楼2012-05-17 09:01:13
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ljapril

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by karin at 2012-05-17 08:43:48:
没有用超声破碎过动物组织,破碎过大肠杆菌。不清楚用超声能不能破碎,应该用液氮研磨比较好。要是可以用超声的话,可以把ep管放在冰上。与组织接触的仪器部分都要认真处理吧,要不会是RNA降解的。
祝好运啊!

1.5的EP管怎么放液氮进去啊?组织就那么一点点,也不好取出来啊
4楼2012-05-17 11:50:42
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