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dfhfzyl

铁虫 (小有名气)

[交流] 扩增全长的疑问 已有4人参与

我最近在做一个基因,其片断在2KB,之前用ex-taq没扩出来.后来,我用高保真酶primestar扩出来了,但这种酶是平滑末端的,有人介绍说可以用PCR产物为模板,用ex-taq酶来扩.果然,我成功扩增出来了.但这两天连接竟然没有连上.
我在想是不是有可能我这个办法行不通啊? 兄弟姐妹们,帮偶分析分析.谢谢了
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-13 16:35:07
你把你用高保真酶扩增出来的片段回收回来,然后用回收回来的片段+buffer+taq+dNTP 70度30分钟,然后16度。
我们实验室有一个同学前些天是用这种方法连上的,你可以试试。
未来不是梦
2楼2012-05-13 15:54:44
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

是要连到T载体吗?
3楼2012-05-13 16:35:25
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lincy2010

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们实验室一直用1楼的方法做T/A克隆的。还有一种平末端的克隆试剂盒也不错,效率挺高的
耐得住寂寞,方能遇见繁华
4楼2012-05-14 14:09:43
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牧歌ping

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你用高保真酶扩增准确性更高,扩增后可以连接zero粘末端载体,只要长斑基本就是连接上了,我们实验室一直用这个载体,很好用,好像是北京全式金的
5楼2012-05-14 20:49:39
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