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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 扩增全长的疑问
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dfhfzyl

铁虫 (小有名气)

[交流] 扩增全长的疑问 已有4人参与

我最近在做一个基因，其片断在2KB，之前用ex-taq没扩出来．后来，我用高保真酶primestar扩出来了，但这种酶是平滑末端的，有人介绍说可以用PCR产物为模板，用ex-taq酶来扩．果然，我成功扩增出来了．但这两天连接竟然没有连上．
我在想是不是有可能我这个办法行不通啊？　兄弟姐妹们，帮偶分析分析．谢谢了
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1楼 2012-05-13 15:47:24
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张宏宇123

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
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西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-13 16:35:07
你把你用高保真酶扩增出来的片段回收回来，然后用回收回来的片段+buffer+taq+dNTP 70度30分钟，然后16度。
我们实验室有一个同学前些天是用这种方法连上的，你可以试试。
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未来不是梦
2楼2012-05-13 15:54:44
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
是要连到T载体吗？
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3楼2012-05-13 16:35:25
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lincy2010

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们实验室一直用1楼的方法做T/A克隆的。还有一种平末端的克隆试剂盒也不错，效率挺高的
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耐得住寂寞，方能遇见繁华
4楼2012-05-14 14:09:43
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牧歌ping

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你用高保真酶扩增准确性更高，扩增后可以连接zero粘末端载体，只要长斑基本就是连接上了，我们实验室一直用这个载体，很好用，好像是北京全式金的
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5楼2012-05-14 20:49:39
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