应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收后再次pcr无目的条带，急，望神人指点。。。
51/1返回列表
查看: 6888  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

weining1203

新虫 (小有名气)

[求助] 胶回收后再次pcr无目的条带，急，望神人指点。。。 已有1人参与

由于有杂带，将目的带胶回收后，进行二次pcr，将模板稀释100倍和1000倍，还是p不出，退货温度为梯度，求大神指点。。。第二张图片中弥散条带比较长的为没有稀释模板的，左边的为模板稀释1000倍的，稀释100倍的和1000倍的pcr图基本一样，不再上传了。。。两次pcr条件一致。。。图和说明在下面

第一次pcr图，目的带860bp左右，但有杂带



二次pcr图，左边的为模板稀释1000倍的，右边的模板没有稀释
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-12 17:17:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-14 13:40:29
二次pcr扩增不出条带来挺正常的，这与引物的结合效率有关，当然也可能是elution buffer中的离子抑制了pcr反应，建议用无菌水洗脱，还有，最好是优化一下pcr条件，一次多p几管，多回收，避免二次pcr
赞一下 回复此楼
6楼2012-05-14 09:40:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

legend0463

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-14 13:40:08
如果你直接把第一块胶的目的片段回收的话，那应该是量太少了。用40-50微升PCR产物跑胶，再回收。然后可以把多条切下的胶混合，增加产物浓度。因为过柱的胶纯化本身会造成很多损失，所以要把其实的浓度加大。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

weining1203
2楼2012-05-13 22:49:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weining1203

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by legend0463 at 2012-05-13 22:49:11:
如果你直接把第一块胶的目的片段回收的话，那应该是量太少了。用40-50微升PCR产物跑胶，再回收。然后可以把多条切下的胶混合，增加产物浓度。因为过柱的胶纯化本身会造成很多损失，所以要把其实的浓度加大。

谢谢您的回复，胶回收后电泳看了一下回收效果，有一条非常微弱的目的条带。是不是胶回收中的一些试剂抑制了二次pcr啊？还有再请教您一下，胶回收可不可以直接克隆测序，不进行二次pcr？
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-14 09:28:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白虾

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你在胶回收洗脱时，用的是试剂盒自带的洗脱液吗?假如是的话就P不出来，我一般都是用灭菌的蒸馏水洗脱。
赞一下(1人) 回复此楼
飞的更高
4楼2012-05-14 09:34:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:01 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:28 by Xc2FxHsHkBNc
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:17 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 6/300 2026-11-07 15:44 by Xc2FxHsHkBNc
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭