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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助关于Ni-Agarose His 蛋白纯化的问题
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mimio113

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助关于Ni-Agarose His 蛋白纯化的问题

这两天做了纯化，使用康为世纪的琼脂糖，使用方法在下面文件中
表达菌体为大肠杆菌
蛋白为包涵体
今天我纯化后，直接取流穿液和洗脱液加SDS煮沸上样跑电泳，结果没有条带，请问是什么原因呢？
请问纯化后收集的蛋白样品要浓缩处理吗？
请问大肠杆菌超声破胞是用什么参数能达到较好的破碎率？[ Last edited by mimio113 on 2012-5-7 at 23:17 ]
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  • 附件 1 : Ni-Agarose.pdf
    • 2012-05-07 23:02:00, 352.6 K

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1楼 2012-05-07 23:03:14
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mimio113

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by indica at 2012-05-08 11:34:07:
跑个总蛋白，直接取菌液煮沸后上样。确定表达出蛋白了再纯化。

表达出了蛋白也不一定能挂柱，有时HIS会被包裹在内部。可接在蛋白另一端试试。

跑了总蛋白，目的蛋白表达量很大的
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3楼2012-05-09 00:58:13
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indica

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-08 13:54:32
跑个总蛋白，直接取菌液煮沸后上样。确定表达出蛋白了再纯化。

表达出了蛋白也不一定能挂柱，有时HIS会被包裹在内部。可接在蛋白另一端试试。
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-08 11:34:07
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