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mimio113

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助关于Ni-Agarose His 蛋白纯化的问题

这两天做了纯化,使用康为世纪的琼脂糖,使用方法在下面文件中
表达菌体为大肠杆菌
蛋白为包涵体
今天我纯化后,直接取流穿液和洗脱液加SDS煮沸上样跑电泳,结果没有条带,请问是什么原因呢?
请问纯化后收集的蛋白样品要浓缩处理吗?
请问大肠杆菌超声破胞是用什么参数能达到较好的破碎率?[ Last edited by mimio113 on 2012-5-7 at 23:17 ]
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  • 附件 1 : Ni-Agarose.pdf
  • 2012-05-07 23:02:00, 352.6 K

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indica

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-08 13:54:32
跑个总蛋白,直接取菌液煮沸后上样。确定表达出蛋白了再纯化。

表达出了蛋白也不一定能挂柱,有时HIS会被包裹在内部。可接在蛋白另一端试试。
2楼2012-05-08 11:34:07
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mimio113

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by indica at 2012-05-08 11:34:07:
跑个总蛋白,直接取菌液煮沸后上样。确定表达出蛋白了再纯化。

表达出了蛋白也不一定能挂柱,有时HIS会被包裹在内部。可接在蛋白另一端试试。

跑了总蛋白,目的蛋白表达量很大的
3楼2012-05-09 00:58:13
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