| 查看: 4836 | 回复: 16 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
十万火急，重组质粒酶切只有一条带，测序有结果，但反复说我质粒浓度很低
|
|||
 我使用的载体是Pet-32a（+），宿主菌是BL21(DE3)，连接上目的基因后，提取重组质粒进行双酶切，30微升体系，酶切能看到两个条带，但目的基因被切下的条带很淡很淡，送出去测序，结果正确，但发送的报告反复说我质粒浓度很低，我进行表达后，确实表达量很不理想，用改目的基因连接到pcDNA3.1(+)上后，转化JM109，重新提取质粒，酶切使用了30微升体系，只看到载体的条带，使用了60微升体系后，目的基因的条带任然非常淡，近乎看不见，送重组菌出去测序，正反两个方向测序，却只有正一个方向有结果，表明我目的基因是连接上去了，但另一个方向测序却无结果，报告说质粒浓度太低，目的基因片段1100，测序公司为北京诺赛。求高手指点迷津，为何我质粒浓度这么低，导致酶切看不见双条带，原核表达量极低？ |
回复此楼» 猜你喜欢
国自然评审意见
已经有16人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有7人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有18人回复
-
2026年叶企孙基金
已经有7人回复
-
我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？
已经有6人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有4人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有13人回复
-
国自然面上复盘~欢迎讨论
已经有14人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 纤维素酶用什么缓冲液溶解啊？
已经有10人回复
- 关于酶用量的计算
已经有6人回复
- 联系导师的疑惑--联系过两个导师，但都很模糊啊？如何是好。。。
已经有4人回复
- 求助：PCR扩增片段测序结果引物中间多出150bp的片段
已经有5人回复
- 求助 高通量测序
已经有3人回复
- PCR产物经酶切电泳后所得的基因型与测序结果不一致，是何原因？该如何处理？
已经有10人回复
- 重组质粒双酶切问题
已经有5人回复
- pcr产物测序和克隆之后重组质粒测序结果一样吗？
已经有12人回复
- BL21(DE3)表达脂肪酶重组质粒，将菌体颜色偏白是是怎么回事
已经有17人回复
- 求助：关于重组质粒目的条带丢失
已经有9人回复
- 请教重组质粒快检的具体方法以及原理。。。。
已经有15人回复
- 【求助/交流】试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,求帮忙分析一下
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于重组质粒的构建，总是失败，希望高手指点一下啊～～
已经有16人回复
- 【求助/交流】重组质粒PCR的taq酶选择！
已经有11人回复
6楼2012-04-11 09:39:39
2楼2012-04-10 08:43:23
3楼2012-04-10 08:55:36
4楼2012-04-10 08:57:18
投票:
30