[交流] 十万火急，重组质粒酶切只有一条带，测序有结果，但反复说我质粒浓度很低

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1楼2012-04-10 08:20:47

龙开聪

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我想在LB平板上加葡萄糖试试，但不知道LB平板是不是只加葡萄糖，那加不加氨苄呢，还是一起加？

4楼2012-04-10 08:57:18

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zhaohq1209

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★
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lz诱导表达的条件可以考虑修改一下~

葡萄糖是不是会一直pet系列载体的表达呢？

2楼2012-04-10 08:43:23

龙开聪

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引用回帖:

2楼: Originally posted by zhaohq1209 at 2012-04-10 08:43:23:
lz诱导表达的条件可以考虑修改一下~

葡萄糖是不是会一直pet系列载体的表达呢？

我用50ml诱导表达没有目的条带，没办法，加到500ML才看到目的条带，体积太大，我不好优化，关键我觉得可能是我质粒浓度低，所以表达量极低，不知如何解决啊

3楼2012-04-10 08:55:36

srlee

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龙开聪: 金币+7, 谢谢，这两天做实验去了，都没空登陆论坛，建议不错，受益不浅 2012-04-12 17:03:32

看来LZ很纠结这个质粒浓度低，呵呵！
1）从你表述的来看，片段是连上了pET32了，测序结果也是正确的，酶切条带的亮弱直接与你提取的质粒浓度有关系，好像与酶切体系没多大关系。
2）试验中我也感觉pET系列载体copy数确实不太高，好像是中等拷贝吧，只好加大提取质粒的菌量了，从而提高质粒的浓度。
3）另外你用的BL21(DE3)是表达蛋白的宿主菌，如果你换用克隆表达宿主菌XL-1 blue或DH5a来提取质粒也许量就会多一些了。
祝实验顺利！

[ Last edited by srlee on 2012-4-11 at 12:49 ]

5楼2012-04-10 22:17:34