应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求解释这pcr是啥问题，帮同学问的^_^
51/1返回列表
查看: 3298  |  回复: 29
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 求解释这pcr是啥问题，帮同学问的^_^

这是以质粒为模板，扩增质粒上的EGFP基因，结果没扩出来，是不是模板的量加的太大呀？跑出来的条带是模板吧？我提质粒之后，50ul的pcr体系加了模板0.5微升，没做出来，然后我把提的质粒稀释了10倍，加0.5ul又没做出来，连条带都没有，大家帮着分析下士啥问题呀？（最右边是天根Marker3，200bp，500，800，1200，2000，3000，4500bp，目的片段应该是700左右，从右边数第二三个不是，是帮别人跑了两个样，其余的是pcr的结果）


[ Last edited by zhang8826857 on 2012-4-5 at 09:37 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

PCR技术 基因工程、分子技术、微生物理论 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
好孩子！
1楼 2012-04-05 09:32:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张文妮

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xinshen0915 at 2012-04-05 10:01:55:
下面的条带应该是引物二聚体，上面的条带很有可能是质粒模板，在做PCR之前要先检测质粒的浓度，一般以质粒为模板做PCR扩增是应该先稀释模板的。问题可以考虑从几个方面解决：
1、确保你的反应体系没有问题，看是 ...

我第二次做是把模板稀释了10倍的，但是电泳跑出来一点儿条带都没有，不像上面的图还有模板条带和引物二聚体条带。。。这又会是什么问题呢？我确实是梯度扩增，而且退火温度是按引物的Tm设置的。
赞一下 回复此楼
5楼2012-04-05 10:22:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 30 个回答

telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
★
西瓜: 金币+1, 确实疑问多多 2012-04-05 18:50:39
你跑个质粒看看位置不就知道，是不是了
你质粒4000多？
引物验证过没问题？酶啥的也没事？
赞一下 回复此楼
我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
2楼2012-04-05 09:44:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张文妮

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by telomerase at 2012-04-05 09:44:35:
你跑个质粒看看位置不就知道，是不是了
你质粒4000多？
引物验证过没问题？酶啥的也没事？

你好~我就是他的同学，质粒确实是4000多，引物也没有问题，酶是刚买的，Takala的，应给不会有问题。我怀疑是不是模板加的量过了。。
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-05 09:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinshen0915

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 很认同，考虑梯度很有道理的啊 2012-04-05 11:39:18
zhang8826857: 金币+5, ★有帮助 2012-04-05 15:51:34
下面的条带应该是引物二聚体，上面的条带很有可能是质粒模板，在做PCR之前要先检测质粒的浓度，一般以质粒为模板做PCR扩增是应该先稀释模板的。问题可以考虑从几个方面解决：
1、确保你的反应体系没有问题，看是否有某种成分未加，确保DNA聚合酶,dNTP, ddH2O等都没有问题；
2、换一种DNA聚合酶试一下；
3、看是否是退火温度设置不合理，可以考虑梯度扩增；
4、如果换了聚合酶和退火温度还是扩不出来，就得考虑是不是引物设计不合理了。
赞一下 回复此楼
Go home or stand up！It's your fucking choice.Do you still remember the reason why you are here?
4楼2012-04-05 10:01:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 30 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 11:51 by xiangy672
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 能否申诉？ +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭