24小时热门版块排行榜    

查看: 2660  |  回复: 29
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 很有用哦 2012-04-05 13:51:04
zhang8826857: 金币+10, 有帮助 2012-04-05 15:52:11
西瓜: 金币+2, MolEPI+1, Good! 2012-04-05 17:14:51
引用回帖:
8楼: Originally posted by 张文妮 at 2012-04-05 11:19:54:
我没做过菌落pcr,但是质粒我是刚提的,跑电泳出来是有的,质粒电泳图片如下,Marker是λ- Hind III DNA Marker。。。紧接着就做pcr了,就是一楼的图片。另外,PCR怎么加对照?我没做过,请指教~~
62/48/876432_1 ...

质粒提取之后不酶切直接跑电泳的方法没法确定质粒的大小和纯度,但从图上来看质粒提取还是比较成功的,用来做模板应该没有问题。

做PCR的时候要加入阳性对照,这样就能确定你的PCR体系和条件是不是有问题。就是确保在你的体系和条件下一定能扩增出来条带,比如在你的问题中,如果加入了阳性对照且能扩增出来条带,说明你的PCR本身是没有问题的。

建议:

1、用nanodrop测一下质粒的浓度,每个PCR反应加入的模板量应该为10~100ng;

2、重复PCR实验。可采用不同的聚合酶进行扩增,最好能做退火温度的梯度;

3、如果手头有针对质粒的其他引物,可以同步扩增,这样可以直接确定模板是不是有问题。

如上三步,基本上就能找出问题所在。祝顺利~好运~
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
10楼2012-04-05 12:20:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

找到一些相关的精华帖子,希望有用哦~

科研从小木虫开始,人人为我,我为人人
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhang8826857 的主题更新
信息提示
请填处理意见