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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 很有用哦 2012-04-05 13:51:04
zhang8826857: 金币+10, ★有帮助 2012-04-05 15:52:11
西瓜: 金币+2, MolEPI+1, Good! 2012-04-05 17:14:51
引用回帖:
8楼: Originally posted by 张文妮 at 2012-04-05 11:19:54:
我没做过菌落pcr,但是质粒我是刚提的，跑电泳出来是有的，质粒电泳图片如下，Marker是λ- Hind III DNA Marker。。。紧接着就做pcr了，就是一楼的图片。另外，PCR怎么加对照？我没做过，请指教~~
62/48/876432_1 ...

质粒提取之后不酶切直接跑电泳的方法没法确定质粒的大小和纯度，但从图上来看质粒提取还是比较成功的，用来做模板应该没有问题。

做PCR的时候要加入阳性对照，这样就能确定你的PCR体系和条件是不是有问题。就是确保在你的体系和条件下一定能扩增出来条带，比如在你的问题中，如果加入了阳性对照且能扩增出来条带，说明你的PCR本身是没有问题的。

建议：

1、用nanodrop测一下质粒的浓度，每个PCR反应加入的模板量应该为10~100ng；

2、重复PCR实验。可采用不同的聚合酶进行扩增，最好能做退火温度的梯度；

3、如果手头有针对质粒的其他引物，可以同步扩增，这样可以直接确定模板是不是有问题。

如上三步，基本上就能找出问题所在。祝顺利~好运~
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
10楼2012-04-05 12:20:16
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