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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关定量PCR，急急急
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lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid

[求助] 有关定量PCR，急急急

最近做了好久的定量ＰＣＲ，耗费了不少试剂，但没什么结果，求助……
我是在文献里面找的引物，在普通ＰＣＲ仪上扩的很好，也摸了退火温度的，特异性也挺好的，扩增片段１００－３００之间，但在ＱＰＣＲ仪（伯乐的ＣＦＸ９６）扩增曲线很不好，要么就是只有最高的几个浓度有信号，要么就是Ｃｔ值基本都大于３０，改变退火温度也没有好转，也尝试了改为３步法，没有好转，但从头至尾熔解曲线都较好，想问问群里的大侠，有没有做这方面精通的，望能指点一二，实验各种悲剧呀，急急急
还有同学的定量ＰＣＲ会出现这样的曲线（不好选择ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ），求解释

定量ＰＣＲ扩增曲线
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orchid
1楼 2012-03-27 16:04:29
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lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-27 16:19:08:
嗯.............
Bio-Rad 的CFX本人非常讨厌，有很较强的边缘效应（我本人也对伯乐的东西有偏见、抱歉）
请问你这个做的是标曲吗？有详细内容了我们才方便参谋参谋

另外，请问，边缘效应是指？
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orchid
5楼2012-03-27 19:15:29
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-28 10:14:23
嗯.............
Bio-Rad 的CFX本人非常讨厌，有很较强的边缘效应（我本人也对伯乐的东西有偏见、抱歉）
请问你这个做的是标曲吗？有详细内容了我们才方便参谋参谋
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lanhuaorchid
Let God do with it as He wills
2楼2012-03-27 16:19:08
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yhyang916

禁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币-100, 广告！ 2012-03-27 19:16:51
西瓜: 编辑内容 2012-04-02 11:14
本帖内容被屏蔽
3楼2012-03-27 16:31:15
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lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-27 16:19:08:
嗯.............
Bio-Rad 的CFX本人非常讨厌，有很较强的边缘效应（我本人也对伯乐的东西有偏见、抱歉）
请问你这个做的是标曲吗？有详细内容了我们才方便参谋参谋

是标曲，阈值线靠下的话，Ct值均在5以内数据就不好分析了，不正常，阈值线手动向上提的话，测得的样品的数据就不好分析了，对于伯乐的CFX96，木有选择呀
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orchid
4楼2012-03-27 19:10:53
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