24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2521  |  回复: 9
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid

[求助] 有关定量PCR,急急急

最近做了好久的定量PCR,耗费了不少试剂,但没什么结果,求助……
我是在文献里面找的引物,在普通PCR仪上扩的很好,也摸了退火温度的,特异性也挺好的,扩增片段100-300之间,但在QPCR仪(伯乐的CFX96)扩增曲线很不好,要么就是只有最高的几个浓度有信号,要么就是Ct值基本都大于30,改变退火温度也没有好转,也尝试了改为3步法,没有好转,但从头至尾熔解曲线都较好,想问问群里的大侠,有没有做这方面精通的,望能指点一二,实验各种悲剧呀,急急急
还有同学的定量PCR会出现这样的曲线(不好选择threshold),求解释

定量PCR扩增曲线
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

orchid
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-27 16:19:08:
嗯.............
Bio-Rad 的CFX本人非常讨厌,有很较强的边缘效应(我本人也对伯乐的东西有偏见、抱歉)
请问你这个做的是标曲吗?有详细内容了我们才方便参谋参谋

是标曲,阈值线靠下的话,Ct值均在5以内数据就不好分析了,不正常,阈值线手动向上提的话,测得的样品的数据就不好分析了,对于伯乐的CFX96,木有选择呀
orchid
4楼2012-03-27 19:10:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-27 16:19:08:
嗯.............
Bio-Rad 的CFX本人非常讨厌,有很较强的边缘效应(我本人也对伯乐的东西有偏见、抱歉)
请问你这个做的是标曲吗?有详细内容了我们才方便参谋参谋

另外,请问,边缘效应是指?
orchid
5楼2012-03-27 19:15:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid

引用回帖:
6楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-27 20:18:53:
嗯...........
1. 阙值还是不要手动调整了好,一般机子自行设定的都是比较可靠的,你若没有一定的定量知识就不要手动调整。你也可选择输出实验结果的荧光值,按照LinRegPCR软件计算后进行Ct矫正输出,不过这里只 ...

好的,谢谢,学习中
orchid
7楼2012-03-27 20:38:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid

引用回帖:
8楼: Originally posted by 可帅儿 at 2012-03-28 10:35:08:
LZ我也是最近在做荧光PCR,也是跑不出结果。。。纠结啊
我怀疑我的反应体系不够标准,还有模板量不足这样的~唉继续研究吧

一起加油吧,应该就是体系和程序的问题
orchid
9楼2012-03-29 19:46:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanhuaorchid

金虫 (著名写手)

orchid

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-27 16:19:08:
嗯.............
Bio-Rad 的CFX本人非常讨厌,有很较强的边缘效应(我本人也对伯乐的东西有偏见、抱歉)
请问你这个做的是标曲吗?有详细内容了我们才方便参谋参谋

另外请问,我的标品是质粒,A260/A230在1.4到1.6之间,太小了,怎么处理呢,谢谢
orchid
10楼2012-04-01 22:55:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lanhuaorchid 的主题更新
信息提示
请填处理意见