| 查看: 3045 | 回复: 9 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
lanhuaorchid金虫 (著名写手)
orchid
|
[求助]
有关定量PCR，急急急
|
||
|
最近做了好久的定量ＰＣＲ，耗费了不少试剂，但没什么结果，求助…… 我是在文献里面找的引物，在普通ＰＣＲ仪上扩的很好，也摸了退火温度的，特异性也挺好的，扩增片段１００－３００之间，但在ＱＰＣＲ仪（伯乐的ＣＦＸ９６）扩增曲线很不好，要么就是只有最高的几个浓度有信号，要么就是Ｃｔ值基本都大于３０，改变退火温度也没有好转，也尝试了改为３步法，没有好转，但从头至尾熔解曲线都较好，想问问群里的大侠，有没有做这方面精通的，望能指点一二，实验各种悲剧呀  ，急急急还有同学的定量ＰＣＲ会出现这样的曲线（不好选择ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ），求解释  定量ＰＣＲ扩增曲线 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有162人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 相对定量PCR求助
已经有16人回复
- 做RT-PCR的战友们，内标定量怎么做？
已经有18人回复
- 相对定量PCR 基线
已经有16人回复
- 定量pcr的污染问题
已经有6人回复
- 【求助】几个关于实时定量PCR的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】荧光定量pcr求助
已经有11人回复
- 【求助/交流】求助，关于荧光定量PCR问题
已经有5人回复
- 【分享】荧光定量PCR简介
已经有13人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR的小问题,请高手指点 【问题已解决】
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR，做过的朋友请进来
已经有11人回复
- 半定量PCR的详细步骤
已经有7人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（二）
已经有12人回复
- 【求助/交流】荧光定量pcr
已经有11人回复
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-28 10:14:23
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-28 10:14:23
|
嗯............. Bio-Rad 的CFX本人非常讨厌，有很较强的边缘效应（我本人也对伯乐的东西有偏见、抱歉） 请问你这个做的是标曲吗？有详细内容了我们才方便参谋参谋  |
lanhuaorchid2楼2012-03-27 16:19:08
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币-100, 广告！ 2012-03-27 19:16:51
西瓜: 编辑内容 2012-04-02 11:14
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币-100, 广告！ 2012-03-27 19:16:51
西瓜: 编辑内容 2012-04-02 11:14
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2012-03-27 16:31:15
lanhuaorchid
金虫 (著名写手)
orchid
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4218.1
- 帖子: 1488
- 在线: 124.5小时
- 虫号: 1301596
- 注册: 2011-05-20
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
4楼2012-03-27 19:10:53
lanhuaorchid
金虫 (著名写手)
orchid
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4218.1
- 帖子: 1488
- 在线: 124.5小时
- 虫号: 1301596
- 注册: 2011-05-20
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
5楼2012-03-27 19:15:29
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good！ 2012-03-28 10:16:18
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good！ 2012-03-28 10:16:18
|
嗯........... 1. 阙值还是不要手动调整了好，一般机子自行设定的都是比较可靠的，你若没有一定的定量知识就不要手动调整。你也可选择输出实验结果的荧光值，按照LinRegPCR软件计算后进行Ct矫正输出，不过这里只是针对相对定量的应用。 2. 边缘效应是指机子的温度控制越到靠边的行或排就越控制不准，偶用CFX96（学校的新机），每次最右边一列就毛都扩不出来，内参也一样，其他都能正常扩增。 3. 按你说的有调出5cycle有信号的这种，基本是不可能出现的，因为一般的Ct在20到35左右才是正常情况。 4. 你自己实验中说的按照文献的引物来做，但还包括反转录、试剂等等各方面的差异因素，不能说就一定重复出来，这个范围太广，不好提出建议 希望有所帮助 |
6楼2012-03-27 20:18:53
lanhuaorchid
金虫 (著名写手)
orchid
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4218.1
- 帖子: 1488
- 在线: 124.5小时
- 虫号: 1301596
- 注册: 2011-05-20
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
7楼2012-03-27 20:38:10
LZ我也是最近在做荧光PCR，也是跑不出结果。。。纠结啊8楼2012-03-28 10:35:08
lanhuaorchid
金虫 (著名写手)
orchid
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4218.1
- 帖子: 1488
- 在线: 124.5小时
- 虫号: 1301596
- 注册: 2011-05-20
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
9楼2012-03-29 19:46:41
lanhuaorchid
金虫 (著名写手)
orchid
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4218.1
- 帖子: 1488
- 在线: 124.5小时
- 虫号: 1301596
- 注册: 2011-05-20
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
10楼2012-04-01 22:55:48
