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小麦籽粒蛋白质提取与SDS-PAGE
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小弟刚刚接触蛋白质测定与电泳，有些问题请教各位，请大家不吝赐教啊。 问题一、 蛋白质提取过程，提取gliadin和glutenin，方法同Wieser and Seilmeier（1998）中的方法。提取后测定gliadin和glutenin的浓度，计算后发现浓度分别只有大概3mg/g flour和12mg/g flour左右，可我从文献中发现别人测定的小麦籽粒蛋白质gliadin和glutenin的浓度大概分别是20mg/g flour和40mg/g flour左右，我的计算过程经过反复核对，应该没有问题，请问谁知道我测定的这个浓度范围靠谱么？ 问题二、 SDS-PAGE 我在做电泳的时候，由于每个样品的蛋白质浓度不同，但是我却将每个样品的上样体积保持了一致，跑出来的胶虽然比较清晰，但是由于不同样品之间浓度不同导致上样量（蛋白质的量）不同，因而不同样品跑出的条带颜色深浅略有不同，但不是很明显。这样的胶还可以在文章中使用么？注：我的试验目的其实并不是定量的，本来是打算看一看不同分子量的蛋白组分所占比例的差异，因此好像不同上样量并不影响。但是我看别人发的文章中，上样量都是保持一致的，因此比较纠结，请各位高手指点。 谢谢。 |
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