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SDS-PAGE与蛋白质内部共价健的关系
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| 请教一个问题,我有一个蛋白,含有二硫键的,用分析柱分析结果,聚体占70%,单体占30%,但是跑非还原的SDS-PAGE,结果聚体占60%,单体占40%。是不是能说明蛋白质聚体里面10%是非二硫键(比如可能是氢键)结合的,跑电泳的时候被打断了,转化成单体了???还是说蛋白内部还有非共价结合的???SDS-PAGE能反映蛋白内部结合的情况吗??? |
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2楼2012-02-03 16:23:39
3楼2012-02-03 16:55:41

4楼2012-02-04 21:27:36
5楼2013-05-12 16:42:33
【答案】应助回帖
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楼主,我来说几句吧,希望能给你解解惑! 1. SDS-page只是用来定性检测蛋白的,并不能用来定量检测!无论是还原性还是费还原性的,因为你跑SDS-page时,胶是有一定厚度的,你要用立体的三维空间结构去想象,并不是在照片上反映的二维平面考马斯亮蓝染色的深浅度,然后你再通过PS粗估浓度的!(希望你能想象和理解!!! )2.非还原性SDS-page并不能完全打开非共价键形成的二聚体或多聚体!我曾今做过一个因子,human NT-4,他的非共价键式的二聚体才具有活性!当时我仍在非还原性胶上检测出来了!!!要想完全打开非共价键形式的二聚体,或许可以通过含有Urea的SDS-PAGE! 3.要想准确的分析你的蛋白到底单体与聚体分别占多少!其实你的分析柱就能说明问题!要想更严谨点,可以送给有关公司打个HPLC! 以上是我个人意见,希望有所帮助!! ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() ![]() |

6楼2013-05-12 19:10:50
yili_90
金虫 (正式写手)
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7楼2013-05-14 13:58:43













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