24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1342  |  回复: 6

xinshi

银虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE与蛋白质内部共价健的关系

请教一个问题,我有一个蛋白,含有二硫键的,用分析柱分析结果,聚体占70%,单体占30%,但是跑非还原的SDS-PAGE,结果聚体占60%,单体占40%。是不是能说明蛋白质聚体里面10%是非二硫键(比如可能是氢键)结合的,跑电泳的时候被打断了,转化成单体了???还是说蛋白内部还有非共价结合的???SDS-PAGE能反映蛋白内部结合的情况吗???
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcppp1974

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流! 2012-02-03 20:34:51
60%和70%是非常接近的,故不能作为差来看!而且氢键不是共价键,所以不用考虑。你说的转化为单体,一般情况下是不会的。建议你跑尿素PAGE,4 M的尿素可以打断氢键
2楼2012-02-03 16:23:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花的泪

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个在误差以内,非还原SDS-PAGE 没有还原剂,不能打开二硫键
3楼2012-02-03 16:55:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

巫圣逸

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
刚刚开始研究这一切好陌生啊!!!!!!!
不以物喜,不以己悲
4楼2012-02-04 21:27:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinshi

银虫 (正式写手)

求助:氧化型谷胱甘肽,百度搜索溶解度一般是50mg/ml,分子量612.63g/M,换算出来就是0.0816mol/L,我配制饱和的氧化型谷胱甘肽,把水加到称量好谷胱甘肽的烧杯中,长时间出现白色絮状物,溶不了,加过量的水(浓度远低于饱和溶解度),还是有白色絮状物。我把烧杯中先加水,在缓慢加入谷胱甘肽,溶解的比上次好,但还是有些白色颗粒残渣。很是不解,求高人指点赐教。
5楼2013-05-12 16:42:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主,我来说几句吧,希望能给你解解惑!

1. SDS-page只是用来定性检测蛋白的,并不能用来定量检测!无论是还原性还是费还原性的,因为你跑SDS-page时,胶是有一定厚度的,你要用立体的三维空间结构去想象,并不是在照片上反映的二维平面考马斯亮蓝染色的深浅度,然后你再通过PS粗估浓度的!(希望你能想象和理解!!!
2.非还原性SDS-page并不能完全打开非共价键形成的二聚体或多聚体!我曾今做过一个因子,human NT-4,他的非共价键式的二聚体才具有活性!当时我仍在非还原性胶上检测出来了!!!要想完全打开非共价键形式的二聚体,或许可以通过含有Urea的SDS-PAGE!
3.要想准确的分析你的蛋白到底单体与聚体分别占多少!其实你的分析柱就能说明问题!要想更严谨点,可以送给有关公司打个HPLC!
以上是我个人意见,希望有所帮助!!
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
6楼2013-05-12 19:10:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yili_90

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

SDS 是sodium dodecyl sulfide.可以使蛋白质活,也就是将较大的蛋白质分开成若干亚基。他只作用于亚基之间的二硫键。第一个作用是使得亚基表面带负电,从而保证了电泳时,所有亚基都会向正极移动。第二个作用是使不带电的亚基或多肽带电,使得他能够根据自身质量不同而向正极移动不同距离

PAGE是polyacrylamide gel electrophoresis.是根据蛋白质大小不同而分离蛋白质的
plummet
7楼2013-05-14 13:58:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xinshi 的主题更新
信息提示
请填处理意见