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SDS-PAGE与蛋白质内部共价健的关系
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| 请教一个问题，我有一个蛋白，含有二硫键的，用分析柱分析结果，聚体占70%，单体占30%，但是跑非还原的SDS-PAGE，结果聚体占60%，单体占40%。是不是能说明蛋白质聚体里面10%是非二硫键（比如可能是氢键）结合的，跑电泳的时候被打断了，转化成单体了？？？还是说蛋白内部还有非共价结合的？？？SDS-PAGE能反映蛋白内部结合的情况吗？？？ |
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【答案】应助回帖
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楼主，我来说几句吧，希望能给你解解惑！ 1. SDS-page只是用来定性检测蛋白的，并不能用来定量检测！无论是还原性还是费还原性的，因为你跑SDS-page时，胶是有一定厚度的，你要用立体的三维空间结构去想象，并不是在照片上反映的二维平面考马斯亮蓝染色的深浅度，然后你再通过PS粗估浓度的！（希望你能想象和理解！！！  ）2.非还原性SDS-page并不能完全打开非共价键形成的二聚体或多聚体！我曾今做过一个因子，human NT-4，他的非共价键式的二聚体才具有活性！当时我仍在非还原性胶上检测出来了！！！要想完全打开非共价键形式的二聚体，或许可以通过含有Urea的SDS-PAGE！ 3.要想准确的分析你的蛋白到底单体与聚体分别占多少！其实你的分析柱就能说明问题！要想更严谨点，可以送给有关公司打个HPLC! 以上是我个人意见，希望有所帮助！！  |
6楼2013-05-12 19:10:50
2楼2012-02-03 16:23:39
3楼2012-02-03 16:55:41
4楼2012-02-04 21:27:36