| 查看: 2337 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
酶切问题
|
||
|
本人前期已近在T载体（买的由PUC18改造而成的）引入带有EcoRI和NcoI的目的片段，现在需再往上连片段。用EcoRI和NcoI双酶切之前构建好的T载体，电泳发现没有条带。接着我在体系中不加酶，加同样的buffer对照,电泳发现也没有条带。可以用同样的EcoRI和NcoI酶和buffer酶切pcr我要连接上的目的片段可以很好酶切。酶切质粒的量是足够的，5道中只上5ul质粒可以见条。双酶切是20ul质粒，3ulbuffer,1ul EcoRI,1ulNcoI,30ul体系。电泳时两个酶切体系60ul在一个孔道里电泳的，不见条带。如果说是buffer降解我的质粒，可是酶切pcr产物却未有问题。如果说没有切开，电泳应该有条带。 求高人指点。 图片说明： 从左往右，第2道1Kb marker,第3道双酶切T载体；第四道不加酶的对照；第5道原始T质粒；第六道空；第7道D2000marker;第8道pcr目的片段；第9道双酶切pcr目的片段  从左往右，第2道1Kb marker,第3道双酶切T载体；第四道不加酶的对照；第5道原始T质粒；第六道空；第7道D2000marker;第8道pcr目的片段；第9道双酶切pcr目的片段 [ Last edited by 1949stone on 2012-3-17 at 12:00 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有255人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 双酶切问题
已经有15人回复
- southern blot 的酶切问题
已经有9人回复
- 酶切问题求助
已经有8人回复
- 连接酶切问题
已经有10人回复
- 求助：关于BamHI SalI 双酶切的问题
已经有16人回复
- 关于酶切的小问题
已经有10人回复
- 单酶切，酶连之后验证问题
已经有6人回复
- 【求助】基因克隆T载体酶切问题等
已经有8人回复
- 【求助/交流】单酶切酶和DNA的比例，体系大小的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】细菌基因组的单酶切问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】双酶切大问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】酶切位点重合了的两个酶的酶切问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】酶切电泳问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】质粒pPICZA酶切问题
已经有5人回复
wcx蜗牛10楼2012-03-20 11:12:27
sunwei57
木虫 (小有名气)
- 应助: 26 (小学生)
- 金币: 4093.2
- 帖子: 225
- 在线: 84.5小时
- 虫号: 1696471
- 注册: 2012-03-16
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
2楼2012-03-17 00:08:02
3楼2012-03-17 09:40:23
sunwei57
木虫 (小有名气)
- 应助: 26 (小学生)
- 金币: 4093.2
- 帖子: 225
- 在线: 84.5小时
- 虫号: 1696471
- 注册: 2012-03-16
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
4楼2012-03-17 11:29:13
5