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酶切问题
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本人前期已近在T载体（买的由PUC18改造而成的）引入带有EcoRI和NcoI的目的片段，现在需再往上连片段。用EcoRI和NcoI双酶切之前构建好的T载体，电泳发现没有条带。接着我在体系中不加酶，加同样的buffer对照,电泳发现也没有条带。可以用同样的EcoRI和NcoI酶和buffer酶切pcr我要连接上的目的片段可以很好酶切。酶切质粒的量是足够的，5道中只上5ul质粒可以见条。双酶切是20ul质粒，3ulbuffer,1ul EcoRI,1ulNcoI,30ul体系。电泳时两个酶切体系60ul在一个孔道里电泳的，不见条带。如果说是buffer降解我的质粒，可是酶切pcr产物却未有问题。如果说没有切开，电泳应该有条带。 求高人指点。 图片说明： 从左往右，第2道1Kb marker,第3道双酶切T载体；第四道不加酶的对照；第5道原始T质粒；第六道空；第7道D2000marker;第8道pcr目的片段；第9道双酶切pcr目的片段  从左往右，第2道1Kb marker,第3道双酶切T载体；第四道不加酶的对照；第5道原始T质粒；第六道空；第7道D2000marker;第8道pcr目的片段；第9道双酶切pcr目的片段 [ Last edited by 1949stone on 2012-3-17 at 12:00 ] |
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3楼2012-03-17 09:40:23
sunwei57
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