24小时热门版块排行榜    

查看: 4710  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lx19880717

金虫 (初入文坛)

[求助] pET-28a原核不能表达目的蛋白 已有2人参与

我在做原核表达的过程中,使用了pET-28a载体,Rosetta(DE3)表达菌株,但是37℃诱导表达后,连包涵体都没有看到,基本没有任何的蛋白表达,所以想请问一下大家,能不能帮我分析一下是什么原因?谢谢。
PS:我的目的蛋白大量重复序列,是否是由于重复序列导致蛋白在表达过程中无法折叠,如果是这个原因有什么办法可以解决,谢谢。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子问题及解决方案汇总

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yanfeier at 2012-04-06 15:12:09:
http://gcua.schoedl.de/seqoverall.html 在线直接就可以分析
如果是稀有密码子的问题  若不是特别严重可以通过选择合适的宿主菌解决的。再有就是你关注一下你的酶切位点,是否导致你的目的片段的读码框是否发生 ...

嗯非常感谢。
Things change, people grow.
9楼2012-04-07 08:39:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

wszhyd

金虫 (初入文坛)

我也遇到楼主一样的问题,选用位点是Nco1 和Xho1 ,也是不表达,帮顶一下,希望高人指点一下。
2楼2012-03-12 16:58:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lx19880717

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by wszhyd at 2012-03-12 16:58:46:
我也遇到楼主一样的问题,选用位点是Nco1 和Xho1 ,也是不表达,帮顶一下,希望高人指点一下。

呵呵,谢谢!
3楼2012-03-12 20:33:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2012-03-14 22:15:48
我跟你一样,也是用的PET28a,不过我用的菌是BL21。
1.你先到上游看看,是不是载体构建的问题;菌p,提质粒酶切,测序看看。
2.上游没问题的话,改变诱导条件试试,T7lac启动子用IPTG1mM诱导6小时看看;
3你的菌有没有问题,可以把构建的重组载体提出来转化到新的感受态试试,我的问题就是这么解决滴
4.换高浓度胶跑跑看看,高浓度提高分辨率。
无善无恶心之体
4楼2012-03-14 17:49:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +7 曦熙兮 2026-03-15 7/350 2026-03-16 16:34 by houyaoxu
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 材料与化工专硕调剂 +3 heming3743 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:05 by peike
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-16 3/150 2026-03-16 10:07 by 求调剂zz
[考研] 化学调剂0703 +7 啊我我的 2026-03-11 7/350 2026-03-15 23:03 by 凌千颂111
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 331求调剂(0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 求调剂 +6 yfihxh 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:18 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂(085602一志愿985) +12 化工人999 2026-03-09 12/600 2026-03-13 12:02 by JourneyLucky
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生,2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
信息提示
请填处理意见