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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 肝脏RNA提取
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flyaway7585

金虫 (正式写手)

[交流] 肝脏RNA提取

提取肝脏（小鼠）的RNA时，大家有没有最后（异丙醇沉淀）出现沉淀太多，有很多蛋白？这种情况该怎么改进？
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1楼 2012-03-11 00:34:05
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zqk0532

铁杆木虫 (小有名气)
★
flyaway7585(金币+1):谢谢参与
肝脏是RNA含量很高的组织之一，异丙醇出现白色沉淀很正常，建议楼主提RNA时，用少量组织即可，50-100mg
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2楼2012-03-11 09:06:41
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flyaway7585

金虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by zqk0532 at 2012-03-11 09:06:41:
肝脏是RNA含量很高的组织之一，异丙醇出现白色沉淀很正常，建议楼主提RNA时，用少量组织即可，50-100mg

谢谢，白色沉淀太多可能是蛋白质杂质，我试试减少组织量，看能不能少点蛋白杂质。
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3楼2012-03-11 12:22:16
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
flyaway7585(金币+1):谢谢参与
小丹木木(金币+2, 专家考核): 有道理，我提的也能看到啊 2012-03-12 10:01:08
是不是蛋白你要看OD260/OD280的值。
纯的RNA量大的时候也会有肉眼可见的白色沉淀滴，我提RNA几乎每次都有。看不到沉淀块时得到的RNA量就很少，2、3微克左右的量就形不成沉淀块了。
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4楼2012-03-11 16:44:34
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flyaway7585

金虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-11 16:44:34:
是不是蛋白你要看OD260/OD280的值。
纯的RNA量大的时候也会有肉眼可见的白色沉淀滴，我提RNA几乎每次都有。看不到沉淀块时得到的RNA量就很少，2、3微克左右的量就形不成沉淀块了。

谢谢交流! 确实一般都可以看到少量沉淀，但是肝脏的沉淀有点多了，太多了。
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5楼2012-03-11 16:54:26
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by flyaway7585 at 2012-03-11 16:54:26:
谢谢交流! 确实一般都可以看到少量沉淀，但是肝脏的沉淀有点多了，太多了。

那么在氯仿抽提的时候，上清取少一些，可以避免蛋白的污染。
其实一般来说，RNA产量不是问题，纯度更重要，特别是肝脏这种RNA含量丰富的样品。
1/3甚至1/4的上清就够了。如果还是有蛋白，可以考虑用氯仿抽提2次，RNA丰富，不怕丢。
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6楼2012-03-11 17:50:16
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flyaway7585

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-11 17:50:16:
那么在氯仿抽提的时候，上清取少一些，可以避免蛋白的污染。
其实一般来说，RNA产量不是问题，纯度更重要，特别是肝脏这种RNA含量丰富的样品。
1/3甚至1/4的上清就够了。如果还是有蛋白，可以考虑用氯仿抽提2次 ...

ok,谢谢
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7楼2012-03-27 10:17:17
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sxxyxh

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
flyaway7585(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流问题 2012-10-26 08:05:06
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http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4736603
http://www.dxy.cn/bbs/topic/2358 ... 2%E4%B8%99%E9%86%87

我昨天提RNA也遇到这个问题，并且我们实验室之前也有人遇到这个问题。

目前我的推测是：匀浆时组织加多了。原因：
1.我之前提的脾脏和头肾组织RNA，效果非常好；偏偏提肝脏出这样的问题，我们实验室人出这问题也是在肝脏组织。后来我发现，TaKaRa的RNAiso Plus提RNA，每g脑组织可提取1500μg RNA，每g烟草叶片可提取1000μg RNA，而每g肝脏组织可提高达5000μg的RNA。
2.测浓度时，OD280值并不大，且跑胶时胶孔未见蛋白残留，说明那一大坨白色物质不太可能是蛋白。

另一个可能的原因是：乙醇未除干净，因为OD230较大，而盐离子浓度影响RNA的溶解度。

另外我想问问楼主，加Trizol后匀浆离心后，上层是否漂有白白的颗粒状东西？
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8楼2012-10-25 23:33:35
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