应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 肝脏RNA提取
81/1返回列表
查看: 1972  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

flyaway7585

金虫 (正式写手)

[交流] 肝脏RNA提取

提取肝脏（小鼠）的RNA时，大家有没有最后（异丙醇沉淀）出现沉淀太多，有很多蛋白？这种情况该怎么改进？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-03-11 00:34:05
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zqk0532

铁杆木虫 (小有名气)
★
flyaway7585(金币+1):谢谢参与
肝脏是RNA含量很高的组织之一，异丙醇出现白色沉淀很正常，建议楼主提RNA时，用少量组织即可，50-100mg
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-11 09:06:41
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyaway7585

金虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by zqk0532 at 2012-03-11 09:06:41:
肝脏是RNA含量很高的组织之一，异丙醇出现白色沉淀很正常，建议楼主提RNA时，用少量组织即可，50-100mg

谢谢，白色沉淀太多可能是蛋白质杂质，我试试减少组织量，看能不能少点蛋白杂质。
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-11 12:22:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
flyaway7585(金币+1):谢谢参与
小丹木木(金币+2, 专家考核): 有道理，我提的也能看到啊 2012-03-12 10:01:08
是不是蛋白你要看OD260/OD280的值。
纯的RNA量大的时候也会有肉眼可见的白色沉淀滴，我提RNA几乎每次都有。看不到沉淀块时得到的RNA量就很少，2、3微克左右的量就形不成沉淀块了。
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-11 16:44:34
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyaway7585

金虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-11 16:44:34:
是不是蛋白你要看OD260/OD280的值。
纯的RNA量大的时候也会有肉眼可见的白色沉淀滴，我提RNA几乎每次都有。看不到沉淀块时得到的RNA量就很少，2、3微克左右的量就形不成沉淀块了。

谢谢交流! 确实一般都可以看到少量沉淀，但是肝脏的沉淀有点多了，太多了。
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-11 16:54:26
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by flyaway7585 at 2012-03-11 16:54:26:
谢谢交流! 确实一般都可以看到少量沉淀，但是肝脏的沉淀有点多了，太多了。

那么在氯仿抽提的时候，上清取少一些，可以避免蛋白的污染。
其实一般来说，RNA产量不是问题，纯度更重要，特别是肝脏这种RNA含量丰富的样品。
1/3甚至1/4的上清就够了。如果还是有蛋白，可以考虑用氯仿抽提2次，RNA丰富，不怕丢。
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-11 17:50:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyaway7585

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-11 17:50:16:
那么在氯仿抽提的时候，上清取少一些，可以避免蛋白的污染。
其实一般来说，RNA产量不是问题，纯度更重要，特别是肝脏这种RNA含量丰富的样品。
1/3甚至1/4的上清就够了。如果还是有蛋白，可以考虑用氯仿抽提2次 ...

ok,谢谢
回复此楼
7楼2012-03-27 10:17:17
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxyxh

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
flyaway7585(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流问题 2012-10-26 08:05:06
同样的问题
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4736603
http://www.dxy.cn/bbs/topic/2358 ... 2%E4%B8%99%E9%86%87

我昨天提RNA也遇到这个问题，并且我们实验室之前也有人遇到这个问题。

目前我的推测是：匀浆时组织加多了。原因：
1.我之前提的脾脏和头肾组织RNA，效果非常好；偏偏提肝脏出这样的问题，我们实验室人出这问题也是在肝脏组织。后来我发现，TaKaRa的RNAiso Plus提RNA，每g脑组织可提取1500μg RNA，每g烟草叶片可提取1000μg RNA，而每g肝脏组织可提高达5000μg的RNA。
2.测浓度时，OD280值并不大，且跑胶时胶孔未见蛋白残留，说明那一大坨白色物质不太可能是蛋白。

另一个可能的原因是：乙醇未除干净，因为OD230较大，而盐离子浓度影响RNA的溶解度。

另外我想问问楼主，加Trizol后匀浆离心后，上层是否漂有白白的颗粒状东西？
赞一下 回复此楼
8楼2012-10-25 23:33:35
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 flyaway7585 的主题更新
81/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +5 Tide man 2026-08-04 8/400 2026-08-04 11:43 by everxc
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 6/300 2026-08-04 11:36 by MWRYsWbJw4DE
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 6/300 2026-08-04 11:34 by MWRYsWbJw4DE
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 7/350 2026-08-04 11:31 by MWRYsWbJw4DE
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:26 by MWRYsWbJw4DE
[基金申请] 娱乐 +3 Tide man 2026-08-03 3/150 2026-08-04 09:58 by gltch
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 17/850 2026-08-04 09:46 by archvillain
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 f1dmPx051StA 2026-08-03 7/350 2026-08-04 09:31 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 5/250 2026-08-04 09:27 by v1TJC4qJauAB
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 09:17 by v1TJC4qJauAB
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 10/500 2026-08-04 09:15 by v1TJC4qJauAB
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 13/650 2026-08-04 07:30 by k7OM8YghWbkC
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭