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flyaway7585

金虫 (正式写手)


[交流] 肝脏RNA提取

提取肝脏(小鼠)的RNA时,大家有没有最后(异丙醇沉淀)出现沉淀太多,有很多蛋白?这种情况该怎么改进?
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zqk0532

铁杆木虫 (小有名气)



flyaway7585(金币+1):谢谢参与
肝脏是RNA含量很高的组织之一,异丙醇出现白色沉淀很正常,建议楼主提RNA时,用少量组织即可,50-100mg
2楼2012-03-11 09:06:41
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flyaway7585

金虫 (正式写手)


引用回帖:
: Originally posted by zqk0532 at 2012-03-11 09:06:41:
肝脏是RNA含量很高的组织之一,异丙醇出现白色沉淀很正常,建议楼主提RNA时,用少量组织即可,50-100mg

谢谢,白色沉淀太多可能是蛋白质杂质,我试试减少组织量,看能不能少点蛋白杂质。
3楼2012-03-11 12:22:16
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★ ★ ★
flyaway7585(金币+1):谢谢参与
小丹木木(金币+2, 专家考核): 有道理,我提的也能看到啊 2012-03-12 10:01:08
是不是蛋白你要看OD260/OD280的值。
纯的RNA量大的时候也会有肉眼可见的白色沉淀滴,我提RNA几乎每次都有。看不到沉淀块时得到的RNA量就很少,2、3微克左右的量就形不成沉淀块了。
4楼2012-03-11 16:44:34
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flyaway7585

金虫 (正式写手)


引用回帖:
: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-11 16:44:34:
是不是蛋白你要看OD260/OD280的值。
纯的RNA量大的时候也会有肉眼可见的白色沉淀滴,我提RNA几乎每次都有。看不到沉淀块时得到的RNA量就很少,2、3微克左右的量就形不成沉淀块了。

谢谢交流! 确实一般都可以看到少量沉淀,但是肝脏的沉淀有点多了,太多了。
5楼2012-03-11 16:54:26
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引用回帖:
5楼: Originally posted by flyaway7585 at 2012-03-11 16:54:26:
谢谢交流! 确实一般都可以看到少量沉淀,但是肝脏的沉淀有点多了,太多了。

那么在氯仿抽提的时候,上清取少一些,可以避免蛋白的污染。
其实一般来说,RNA产量不是问题,纯度更重要,特别是肝脏这种RNA含量丰富的样品。
1/3甚至1/4的上清就够了。如果还是有蛋白,可以考虑用氯仿抽提2次,RNA丰富,不怕丢。
6楼2012-03-11 17:50:16
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flyaway7585

金虫 (正式写手)


引用回帖:
6楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-11 17:50:16:
那么在氯仿抽提的时候,上清取少一些,可以避免蛋白的污染。
其实一般来说,RNA产量不是问题,纯度更重要,特别是肝脏这种RNA含量丰富的样品。
1/3甚至1/4的上清就够了。如果还是有蛋白,可以考虑用氯仿抽提2次 ...

ok,谢谢
7楼2012-03-27 10:17:17
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sxxyxh

新虫 (初入文坛)


★ ★ ★ ★
flyaway7585(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流问题 2012-10-26 08:05:06
同样的问题
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4736603
http://www.dxy.cn/bbs/topic/2358 ... 2%E4%B8%99%E9%86%87

我昨天提RNA也遇到这个问题,并且我们实验室之前也有人遇到这个问题。

目前我的推测是:匀浆时组织加多了。原因:
1.我之前提的脾脏和头肾组织RNA,效果非常好;偏偏提肝脏出这样的问题,我们实验室人出这问题也是在肝脏组织。后来我发现,TaKaRa的RNAiso Plus提RNA,每g脑组织可提取1500μg RNA,每g烟草叶片可提取1000μg RNA,而每g肝脏组织可提高达5000μg的RNA。
2.测浓度时,OD280值并不大,且跑胶时胶孔未见蛋白残留,说明那一大坨白色物质不太可能是蛋白。

另一个可能的原因是:乙醇未除干净,因为OD230较大,而盐离子浓度影响RNA的溶解度。

另外我想问问楼主,加Trizol后匀浆离心后,上层是否漂有白白的颗粒状东西?
8楼2012-10-25 23:33:35
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