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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 原核表达的问题
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liujinlj0305

木虫 (小有名气)

[求助] 原核表达的问题

最近在构建重组质粒，用pTYB12作载体连一个1900bp左右的片段，转化ER2566，在转化板上挑取阳性克隆后做酶切验证，始终只看到切开的载体片段，没看到目的片段;提取阳性克隆的质粒与pTYB12跑胶比对，发现是比载体要大的；做PCR验证也扩出来了1900的条带，阴性对照也没有条带出现；后来试着做了下诱导表达，结果没看见诱导条带出现。现在对这种情况感觉真是有点烦躁了，不知道哪位高手帮忙解答一下啊！
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1楼 2012-03-10 17:13:29
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2061

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liujinlj0305: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-04-16 14:45:34
应该是没转化成功，重新连连试试
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2楼2012-04-16 14:44:49
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般构建好的工程菌要先测序的，不知道楼主有没有测序
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3楼2012-04-16 16:10:27
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陌墨红尘

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是酶切时间长了点，把小片段切没了？
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4楼2012-04-18 15:01:45
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