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lamprr

银虫 (初入文坛)

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注册: 2011-11-23
专业: 环境微生物学

[求助] 目的蛋白序列连接pet15b测序结果正确为何不表达

最近作表达将质粒（测序结果正确）转入bl21中，摇菌2小时，加iptg1mM，37度4小时。没有任何特异条带，是怎么回事呢？请问菌种要求高么？我们的Bl21实验室用很久了，是不是菌种不行呢？还有什么因素应该考虑？请各位高手帮我分析一下，谢谢啦

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1楼2012-03-02 11:19:46

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若水5886

新虫 (小有名气)

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专业: 蛋白质组学

首先要看你的质粒有没有转入到合适的宿主菌中，如果质粒表达的是毒蛋白就要用BL21DE3。转化之后要PCR鉴定看看有没有转进去。
诱导表达的温度可以设置15，25，30几个梯度看看，还有就是设计引物的时候要注意核酸的个数，不要多或者少了让密码子错位，这样即使目的片段序列正确也没有目的蛋白表达出来。
最后跑电泳观察的时候最好是上清和沉淀都上样看看，确定蛋白在哪里

赞一下(1人)

7楼2012-03-05 11:21:12

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