应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家帮忙看看我的蛋白电泳有目的带吗
111/2返回列表12下一页
查看: 2682  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 大家帮忙看看我的蛋白电泳有目的带吗 已有1人参与

图中的A1-A6和B1-B6是两个平行组分别诱导1、2、3、4、5、6h，我的蛋白约40kD左右
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
无善无恶心之体
1楼 2012-02-17 09:50:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)
补充：：：： 图中C代表未用IPTG诱导，P为未导入目的基因的空载体/菌诱导表达。我的体系是pET28a/BL21（DH5）。
赞一下 回复此楼
无善无恶心之体
2楼2012-02-17 09:53:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

karin

木虫 (小有名气)
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-17 13:49:02
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhiqiang5070 at 2012-02-17 09:53:56:
补充：：：： 图中C代表未用IPTG诱导，P为未导入目的基因的空载体/菌诱导表达。我的体系是pET28a/BL21（DH5）。

从电泳图看好像没有目的条带。不过pET-28a是带组氨酸标签的，也就是说你表达的蛋白两端都带一段组氨酸，你可以用组氨酸特异抗体做个Western杂交，真正表不表达就知道了。
赞一下 回复此楼
坚持就是胜利
3楼2012-02-17 10:17:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shicaozhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-17 13:48:45
zhiqiang5070(金币+3): ★有帮助 2012-02-20 15:30:07
按说pET28a的表达产物是单一的，为什么你的图上面有这么多的条带啊？这些条带是培养基里面的蛋白么？建议你用TB培养试试，还有就是不要单纯的用IPTG诱导，适量添加些乳糖。你的样品条带一样的，没有目的条带出现。
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-17 13:10:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by shicaozhu at 2012-02-17 13:10:20:
按说pET28a的表达产物是单一的，为什么你的图上面有这么多的条带啊？这些条带是培养基里面的蛋白么？建议你用TB培养试试，还有就是不要单纯的用IPTG诱导，适量添加些乳糖。你的样品条带一样的，没有目的条带出现。

大肠杆菌自身会表达很多的蛋白的啊
赞一下 回复此楼
无善无恶心之体
5楼2012-02-17 14:01:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qjy_134

铜虫 (小有名气)
小丹木木(金币+2): 鼓励积极交流哦 2012-02-18 08:14:44
要不就是没有高表达，要不就是你没做好，建议你加一个有高表达的作为阳性对照，诱导3个小时就可以很清楚看到是否高表达，关键是你要控制好诱导条件，在OD多少的时候诱导
赞一下 回复此楼
6楼2012-02-17 17:49:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shicaozhu

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhiqiang5070 at 2012-02-17 14:01:39:
大肠杆菌自身会表达很多的蛋白的啊

我用这个质粒做表达的时候，诱导时OD一般为1.0左右，然后加入诱导剂，12，24小时的产物都是单一的，只有36小时后，有比较淡的杂带出现，应该是细胞裂解的碎片。不过我的发酵培养基是TB，你的是什么？
赞一下 回复此楼
7楼2012-02-18 09:57:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
建议你先用LB培养基试试吧，条件如下，先用3ml培养基挑单菌落培养大概5个小时做种子（37度，250rpm），然后2％的接种量，培养到A600，1.2到1.5之间诱导，诱导时采用25度，250rpm，过夜，如果还是没有目标蛋白，你就要确认你的载体了，如果没有问题，你可能要考虑换下载体了
赞一下 回复此楼
8楼2012-02-18 11:33:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

btx362237729

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
zhiqiang5070(金币+1): ★有帮助 2012-02-20 15:29:25
没有目的条带。。。。你的电泳缓冲液该换新的了  我看感觉都是些杂带
赞一下 回复此楼
人生最黑暗的时光终于过去了
9楼2012-02-18 18:48:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张鹏8902

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

为什么条带不一样直呢？板没清洗干净的样子啊
赞一下 回复此楼
你若盛开，清风自来
10楼2013-04-11 15:18:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhiqiang5070 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +14 爱看书的可乐 2026-08-26 16/800 2026-08-26 16:47 by skyjudy
[基金申请] 基金不中，共勉 +3 eulota 2026-08-26 3/150 2026-08-26 16:17 by 路yyyy
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +26 yaoyewhu2008 2026-08-20 28/1400 2026-08-26 13:49 by zzuzxg
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭