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提RNA反转录后，用GAPDH和TLR进行PCR，可是GAPDH条带很亮，TLR怎么都出不来
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各位大侠，我最近提了RAW264.7细胞的RNA，反转录后，用GAPDH和TLR进行PCR，可是GAPDH条带很亮，TLR怎么都出不来。 第一次加了6微升DEPC水溶解RNA，然后取5微升RNA溶液作RT-PCR（20微升体系），再分别用GAPDH和TLR2进行PCR。 图见1 第二次取500ng 小鼠肺组织、RAW264.7细胞的总RNA，进行逆转，用的是M-MLV的酶，按照protocol上的10微升体系，在用TLR1和GAPDH进行PCR。结果还是只有很亮的GAPDH，不过两次PCR都有很多引物二聚体。 见图2 谁能告诉我这到底是为什么呀~~~  1 MARKER 1RAW(GAPDH tlr2) 2RAW(GAPDH tlr2)  2 MARKER TLR1(肺 1RAW 2RAW) GAPDH(肺 1RAW 2RAW).jpg |
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