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julietguo

银虫 (正式写手)

[求助] 提RNA反转录后,用GAPDH和TLR进行PCR,可是GAPDH条带很亮,TLR怎么都出不来

各位大侠,我最近提了RAW264.7细胞的RNA,反转录后,用GAPDH和TLR进行PCR,可是GAPDH条带很亮,TLR怎么都出不来。
第一次加了6微升DEPC水溶解RNA,然后取5微升RNA溶液作RT-PCR(20微升体系),再分别用GAPDH和TLR2进行PCR。
图见1
第二次取500ng 小鼠肺组织、RAW264.7细胞的总RNA,进行逆转,用的是M-MLV的酶,按照protocol上的10微升体系,在用TLR1和GAPDH进行PCR。结果还是只有很亮的GAPDH,不过两次PCR都有很多引物二聚体。
见图2
谁能告诉我这到底是为什么呀~~~

1 MARKER 1RAW(GAPDH tlr2) 2RAW(GAPDH tlr2)



2 MARKER TLR1(肺 1RAW 2RAW) GAPDH(肺 1RAW 2RAW).jpg
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julietguo

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by frank213 at 2012-01-09 18:32:27:
能不能看下你rrna的条带如何。提取完全吗

我们实验室提过RNA后就直接逆转的,没有跑rRNA哎。。
9楼2012-01-10 09:15:21
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lihegang2000

铁杆木虫 (正式写手)

你首先确定在这些组织中表达不
2楼2012-01-08 09:36:37
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julietguo

银虫 (正式写手)

引用回帖:
: Originally posted by lihegang2000 at 2012-01-08 09:36:37:
你首先确定在这些组织中表达不

我用来PCR的TLR是表达的呀,而且引物之前检测的也没问题呀
3楼2012-01-08 10:23:36
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julietguo

银虫 (正式写手)

引用回帖:
: Originally posted by lihegang2000 at 2012-01-08 09:36:37:
你首先确定在这些组织中表达不

我昨晚用IL-6和IL-4的引物检测了下我的cDNA,IL-6出来了,还挺亮的,我就奇怪了,这是不是说明我的RNA提的没问题,包括逆转也对的呀?
4楼2012-01-08 10:59:05
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