应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/1返回列表
查看: 7453  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

經天

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？

最近在做荧光定量PCR，取1.0ug的RNA反转以后用NANoDrop测量cDNA的量，ssDNA的值怎么都不一样啊，这样是不是表明反转的效率还是有些差距的啊？这样上机能准确吗，机械重复没有问题，可是生物学重复就会差距很大了，用2ΔΔCt算会影响结果吗？

求高手赐教啊。

[ Last edited by 經天 on 2012-1-6 at 00:10 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物信息学软件应用

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-01-05 11:00:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘仕博

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 感谢积极交流哦 2012-01-05 15:53:22
經天(金币+8): 2012-01-07 12:08:50
real time PCR看的是基因的相对表达量，它要求在反转录的时候加入相同质量的mRNA，然后看相同量的基本的表达有什么区别。所以LZ在最开始反转录的时候就错了，你仔细看一下反转录试剂盒的使用说明书，它一般都要求加入mRNA的质量而不是体积，这样就可以达到定量的效果。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2012-01-05 13:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

通缉要饭

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 鼓励积极交流哦 2012-01-05 15:52:54
一个最简单最准确的方法：用actin引物跑个定量，看看各个样品的CT值，然后根据CT值稀释就可以啦，如果稀释完你还不放心，再用actin跑个定量，看看CT值是不是基本一直就OK啦
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2012-01-05 14:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heroyl

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2012-01-06 01:09:47
1、不同的样品RNA测浓度，要求浓度是一致的。
2、做内参，最后算的是ΔCt。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2012-01-05 19:39:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

經天

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 通缉要饭 at 2012-01-05 14:13:24:
一个最简单最准确的方法：用actin引物跑个定量，看看各个样品的CT值，然后根据CT值稀释就可以啦，如果稀释完你还不放心，再用actin跑个定量，看看CT值是不是基本一直就OK啦

这个方法没试过，操作听简单，不过文章不好写了。
赞一下 回复此楼
5楼2012-01-06 00:11:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

經天

铁杆木虫 (著名写手)
西瓜: 他的意思是说，用相同量的RNA来做反转录。 2012-01-06 18:48:40
引用回帖:
楼: Originally posted by heroyl at 2012-01-05 19:39:46:
1、不同的样品RNA测浓度，要求浓度是一致的。
2、做内参，最后算的是ΔCt。

RNA浓度在提取的时候很难做到一致啊，是算ΔCt，可是生物学重复之间的差距比较大以后数据就不敢用了啊。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-01-06 00:13:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

通缉要饭

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
楼: Originally posted by 經天 at 2012-01-06 00:11:51:
这个方法没试过，操作听简单，不过文章不好写了。

我们实验室一般都采用这样的方法。写文章的时候，这部分没有必要描述的这么详细哈，一笔概过。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2012-01-06 07:34:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heroyl

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-01-06 18:49:33
引用回帖:
6楼: Originally posted by 經天 at 2012-01-06 00:13:41:
RNA浓度在提取的时候很难做到一致啊，是算ΔCt，可是生物学重复之间的差距比较大以后数据就不敢用了啊。

将RNA提取之后测浓度，肯定是要稀释之后才做荧光定量啊。
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2012-01-06 11:11:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

經天

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by heroyl at 2012-01-06 11:11:03:
将RNA提取之后测浓度，肯定是要稀释之后才做荧光定量啊。

我测完浓度才能定量到1ug去反转的，为了保险我也测了一下cDNA浓度，这个时候不一样了，做定量根据基因的表达量稀释以后在上机的。
赞一下 回复此楼
9楼2012-01-06 21:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heroyl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
經天(金币+12): 2012-01-07 12:09:02
引用回帖:
9楼: Originally posted by 經天 at 2012-01-06 21:49:05:
我测完浓度才能定量到1ug去反转的，为了保险我也测了一下cDNA浓度，这个时候不一样了，做定量根据基因的表达量稀释以后在上机的。

其实你不用测CDNA的，一般测CDNA测的不是很精确的。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2012-01-07 11:11:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hpzinc65

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你测的cDNA浓度和260/280  260/230是多少啊，我的总是跑不出来，测出来浓度一般在一千纳克每微升左右
赞一下 回复此楼
11楼2012-11-24 21:32:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangtaotian

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
CDNA不能用NANODROP测浓度，CDNA液里的背景设置不了。因为blank不是ddH2O，还有5Xbuffer和各种杂质比如说引物和dNTP酶和抑制剂等。
赞一下 回复此楼
12楼2013-06-09 21:46:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

哈皮果果

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by huangtaotian at 2013-06-09 21:46:34
CDNA不能用NANODROP测浓度，CDNA液里的背景设置不了。因为blank不是ddH2O，还有5Xbuffer和各种杂质比如说引物和dNTP酶和抑制剂等。

您好，想问下，如果不能用nanodrop测浓度，那上机时如何定量呢？
赞一下 回复此楼
13楼2014-12-04 23:41:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 經天 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 377求调剂 +6 by.ovo 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:18 by dongzh2009
[考研] 材料工程302分求调剂 +9 zyx上岸！ 2026-04-04 9/450 2026-04-05 22:08 by 醉翁wl
[考研] 材料调剂 +7 一样YWY 2026-04-05 8/400 2026-04-05 21:20 by 学员8dgXkO
[考研] 086000生物与医药298调剂求助 +9 元元青青 2026-03-31 12/600 2026-04-05 21:03 by 学员8dgXkO
[考研] 301求调剂 +3 XYPLR 2026-04-05 4/200 2026-04-05 19:07 by XYPLR
[考研] 295求调剂 +8 FZAC123 2026-04-03 8/400 2026-04-05 17:46 by 蓝云思雨
[考研] 298求调剂 +5 zzz，，r 2026-04-02 8/400 2026-04-04 19:55 by 蓝云思雨
[考研] 319求调剂 +4 星星不眨眼喽 2026-04-03 4/200 2026-04-04 16:25 by 中飞院空管学院�
[考研] 309求调剂 +6 刘刘刘1231 2026-04-02 7/350 2026-04-04 13:41 by liucky
[考研] 265求调剂 +17 林深温澜 2026-04-01 20/1000 2026-04-04 01:09 by userper
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +7 困困困困坤坤 2026-04-02 7/350 2026-04-03 17:26 by Yuena_Wang
[考研] 工科341分调剂 +3 洛多罗 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:20 by 1753564080
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +9 哇呼哼呼哼 2026-04-02 9/450 2026-04-03 12:05 by 1753564080
[考研] 338求调剂，一志愿能源动力，外语是日语203 +5 zzz，，r 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:45 by 蓝云思雨
[考博] 申博求助 +3 Reee1Llll 2026-04-01 3/150 2026-04-02 22:29 by 这是一个无聊的�
[考研] 一志愿郑大材料工程290求调剂 +20 Youth_ 2026-03-30 20/1000 2026-04-02 14:48 by 5896
[考博] 26年申博 +3 staryer 2026-03-30 4/200 2026-04-01 23:21 by ai4pharm
[考研] 286求调剂 +5 Sa67890. 2026-04-01 7/350 2026-04-01 19:50 by 6781022
[考研] 350求调剂 +7 阿佳～ 2026-03-31 7/350 2026-04-01 16:12 by yanflower7133
[考研] 材料调剂 +10 Eujd1 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:23 by ivanqyq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭