应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？
51/1返回列表
查看: 7185  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

經天

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？

最近在做荧光定量PCR，取1.0ug的RNA反转以后用NANoDrop测量cDNA的量，ssDNA的值怎么都不一样啊，这样是不是表明反转的效率还是有些差距的啊？这样上机能准确吗，机械重复没有问题，可是生物学重复就会差距很大了，用2ΔΔCt算会影响结果吗？

求高手赐教啊。

[ Last edited by 經天 on 2012-1-6 at 00:10 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物信息学软件应用

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-01-05 11:00:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

經天

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by heroyl at 2012-01-06 11:11:03:
将RNA提取之后测浓度，肯定是要稀释之后才做荧光定量啊。

我测完浓度才能定量到1ug去反转的，为了保险我也测了一下cDNA浓度，这个时候不一样了，做定量根据基因的表达量稀释以后在上机的。
赞一下 回复此楼
9楼2012-01-06 21:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

刘仕博

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 感谢积极交流哦 2012-01-05 15:53:22
經天(金币+8): 2012-01-07 12:08:50
real time PCR看的是基因的相对表达量，它要求在反转录的时候加入相同质量的mRNA，然后看相同量的基本的表达有什么区别。所以LZ在最开始反转录的时候就错了，你仔细看一下反转录试剂盒的使用说明书，它一般都要求加入mRNA的质量而不是体积，这样就可以达到定量的效果。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2012-01-05 13:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

通缉要饭

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 鼓励积极交流哦 2012-01-05 15:52:54
一个最简单最准确的方法：用actin引物跑个定量，看看各个样品的CT值，然后根据CT值稀释就可以啦，如果稀释完你还不放心，再用actin跑个定量，看看CT值是不是基本一直就OK啦
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2012-01-05 14:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heroyl

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2012-01-06 01:09:47
1、不同的样品RNA测浓度，要求浓度是一致的。
2、做内参，最后算的是ΔCt。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2012-01-05 19:39:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭