[交流] 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？

楼: Originally posted by 通缉要饭 at 2012-01-05 14:13:24:
一个最简单最准确的方法：用actin引物跑个定量，看看各个样品的CT值，然后根据CT值稀释就可以啦，如果稀释完你还不放心，再用actin跑个定量，看看CT值是不是基本一直就OK啦

楼: Originally posted by heroyl at 2012-01-05 19:39:46:
1、不同的样品RNA测浓度，要求浓度是一致的。
2、做内参，最后算的是ΔCt。

楼: Originally posted by 經天 at 2012-01-06 00:11:51:
这个方法没试过，操作听简单，不过文章不好写了。

6楼: Originally posted by 經天 at 2012-01-06 00:13:41:
RNA浓度在提取的时候很难做到一致啊，是算ΔCt，可是生物学重复之间的差距比较大以后数据就不敢用了啊。

楼: Originally posted by heroyl at 2012-01-06 11:11:03:
将RNA提取之后测浓度，肯定是要稀释之后才做荧光定量啊。

9楼: Originally posted by 經天 at 2012-01-06 21:49:05:
我测完浓度才能定量到1ug去反转的，为了保险我也测了一下cDNA浓度，这个时候不一样了，做定量根据基因的表达量稀释以后在上机的。

12楼: Originally posted by huangtaotian at 2013-06-09 21:46:34
CDNA不能用NANODROP测浓度，CDNA液里的背景设置不了。因为blank不是ddH2O，还有5Xbuffer和各种杂质比如说引物和dNTP酶和抑制剂等。