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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？
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經天

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？

最近在做荧光定量PCR，取1.0ug的RNA反转以后用NANoDrop测量cDNA的量，ssDNA的值怎么都不一样啊，这样是不是表明反转的效率还是有些差距的啊？这样上机能准确吗，机械重复没有问题，可是生物学重复就会差距很大了，用2ΔΔCt算会影响结果吗？

求高手赐教啊。

[ Last edited by 經天 on 2012-1-6 at 00:10 ]
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1楼 2012-01-05 11:00:39
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刘仕博

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+1): 感谢积极交流哦 2012-01-05 15:53:22
經天(金币+8): 2012-01-07 12:08:50
real time PCR看的是基因的相对表达量，它要求在反转录的时候加入相同质量的mRNA，然后看相同量的基本的表达有什么区别。所以LZ在最开始反转录的时候就错了，你仔细看一下反转录试剂盒的使用说明书，它一般都要求加入mRNA的质量而不是体积，这样就可以达到定量的效果。
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2楼2012-01-05 13:20:10
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