| 查看: 4026 | 回复: 22 | ||||
majunyang银虫 (初入文坛)
|
[求助]
蛋白纯化遇到问题
|
|||
| 从野生菌里纯化不同蛋白酶组分，发酵液过阴离子柱，穿透峰里检测有酶活，7-56ms/cm电导下也有酶活，流速3ML/min，跑蛋白电泳不能确定是不是同一个组分，又过阳离子柱，还是出现在穿透峰里，洗脱峰居然没有，怎么回事？？？？？？谢谢！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
建议基金发布提前给出明确的时间点
已经有12人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有3人回复
-
科研孤儿太难了
已经有17人回复
-
今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果
已经有19人回复
-
看来今天不会放榜了？
已经有11人回复
-
时间戳又变了
已经有19人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有14人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有13人回复
-
人气不行了
已经有7人回复
-
感觉是下周放榜了
已经有12人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- FPLC蛋白纯化堵柱子？
已经有24人回复
- 求助：纯化蛋白遇到包涵体了，尿素怎么用？
已经有17人回复
- 蛋白互作必会，GST纯化遇到的问题
已经有13人回复
- 大家帮忙分析一下我的蛋白纯化时出现的问题吧，不胜感激
已经有5人回复
- 蛋白纯化分离问题
已经有19人回复
- 关于蛋白纯化的问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】蛋白质纯化的疑难问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】蛋白质的阴离子交换纯化
已经有13人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化问题，怎样分离约35kD和26kD的条带
已经有10人回复
- 【求助/交流】SP柱子纯化蛋白，蛋白结合后，用2M NacL都没有洗脱下来，该怎么办？
已经有5人回复
- 基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱
已经有26人回复
10楼2012-01-02 23:17:38
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - MicEPI: 114
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19804.7
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6620
- 在线: 2793.8小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
13楼2012-01-05 00:51:47
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - MicEPI: 114
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19804.7
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6620
- 在线: 2793.8小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金币+5): 鼓励应助 2012-01-06 08:41:19
zhang8826857(金币+5): 鼓励应助 2012-01-06 08:41:19
|
无论是阴阳离子交换层析柱都要求目的蛋白质的pI与所使用的pH体系相差1个单位，但对于自己从没有纯化过的一个蛋白质来说，pI是未知的，如果用粗酶来测定pI又不够准确。其实没必要测定pI，只要做一个预备实验就可以知道应该使用什么样的pH值缓冲体系：如果有AKTA纯化仪，就使用一根CV=1ml 的层析柱（阴阳层析柱都要做这个预备实验）来吸附蛋白质，收集流穿，然后用1M氯化钠清洗层析柱并收集，这样的两个组分哪个含有你的酶，就知道起码要多少的pH值才能吸附你的酶了。 千万要注意用离子交换层析柱的样品所含盐浓度要低，盐析之后的沉淀含有盐，不能直接用离子交换层析柱来分离，最好是用G25脱盐柱来脱盐，最不济也要透析除盐。 7-56ms/cm是较低的电导，也有酶活说明是pH选择不当，不是样品里含盐多，如果是含盐多，则电导率会高。 在蛋白质能被牢牢吸附的情况下，3ml/min不算高，我使用CV=1ML的层析柱时也使用1ml/min，没问题。 分子筛的先决条件是目的蛋白质与杂质蛋白质分子量相差起码为1倍，但是蛋白酶分子量不会太小，绝大多数蛋白质都处于30-80KD之间，分不开的。 |
14楼2012-01-06 08:29:51
majunyang
银虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 739.6
- 帖子: 25
- 在线: 68.9小时
- 虫号: 1240657
- 注册: 2011-03-21
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2011-12-31 10:28:14
lihuan0525
金虫 (职业作家)
- 应助: 565 (博士)
- 金币: 2155
- 散金: 687
- 红花: 15
- 帖子: 3301
- 在线: 551.8小时
- 虫号: 1292024
- 注册: 2011-05-11
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
3楼2011-12-31 16:44:23
majunyang
银虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 739.6
- 帖子: 25
- 在线: 68.9小时
- 虫号: 1240657
- 注册: 2011-03-21
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2011-12-31 20:05:17
5楼2012-01-01 00:31:47
majunyang
银虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 739.6
- 帖子: 25
- 在线: 68.9小时
- 虫号: 1240657
- 注册: 2011-03-21
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
6楼2012-01-01 19:08:55
7楼2012-01-01 23:35:24
凡夫俗子
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 59 (初中生)
- 金币: 39852.3
- 散金: 309
- 红花: 2
- 帖子: 10148
- 在线: 574.6小时
- 虫号: 155748
- 注册: 2006-01-04
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
8楼2012-01-02 09:37:30
dasheng1980
铁杆木虫 (知名作家)
大圣
- 应助: 64 (初中生)
- 金币: 7702.4
- 红花: 3
- 沙发: 7
- 帖子: 8882
- 在线: 412.8小时
- 虫号: 1363851
- 注册: 2011-08-09
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
9楼2012-01-02 22:02:21
40