应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌引物 338F 518R 做DGGE之后 pcr
101/1返回列表
查看: 4889  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

@@xiaowu@@

铜虫 (初入文坛)

[求助] 细菌引物 338F 518R 做DGGE之后 pcr 已有1人参与

DGGE 之后 pcr 出来的有两条带 还不清晰 怎么回事呀 请大侠 帮分析一下

12



[ Last edited by @@xiaowu@@ on 2011-12-29 at 20:03 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-12-29 20:00:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyj863

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫，加油 2011-12-30 10:53:48
PCR两条带差的较大，感觉是PCR的问题，理论上说你DGGE上样样品是大小类似的DNA，问题说明有些太简单，不好分析原因，详细说说实验方法步骤，可能有助于解决你的问题。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-12-29 21:47:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

@@xiaowu@@

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by liuyj863 at 2011-12-29 21:47:24:
PCR两条带差的较大，感觉是PCR的问题，理论上说你DGGE上样样品是大小类似的DNA，问题说明有些太简单，不好分析原因，详细说说实验方法步骤，可能有助于解决你的问题。

带GC 的pcr产物挺亮的 DGGE跑完也很好
然后是pcr

10倍buffer 2.5
dntp  2.5
F与R 1
酶  0.25
模板 5
94 1min
60 1min
72 1min
35循环
赞一下 回复此楼
3楼2011-12-30 09:48:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyj863

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
rainwander(金币+3): 鼓励交流 2012-01-01 17:35:30
DGGE条带割下来后，是怎么制备PCR模板的，时间放置有多长，根据我的经验，DGGE条带割出来后放置时间长了会出现扩增得不到产物，涂抹带之类的情况。另外，扩增引物也是带了GC夹?是为了再跑一次DGGE，还是...  （我以前割单条DGGE带后无菌水冲洗，置于30ul无菌水中，无菌枪头捣碎，置于4°C 过夜，第二天取1ul液体扩增，效果很好。现在很多年没做过了，详细情况也有些忘记了）
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-12-30 11:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uneei

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
zhang8826857(金币+3): 鼓励新虫 2011-12-30 21:18:36
引用回帖:
4楼: Originally posted by liuyj863 at 2011-12-30 11:27:39:
DGGE条带割下来后，是怎么制备PCR模板的，时间放置有多长，根据我的经验，DGGE条带割出来后放置时间长了会出现扩增得不到产物，涂抹带之类的情况。另外，扩增引物也是带了GC夹?是为了再跑一次DGGE，还是...  （我 ...

你好，我今天刚刚才做了PCR，昨天切胶，用无菌水洗了两次，加入50微升的无菌水，无菌枪头捣碎，4℃过夜，今天吸取10微升做模板，做60微升体系的PCR，十几个样只有一个扩增效果还可以，其他的不是都二聚体就是只有一点点很淡的条带，这是为什么啊？我的DGGE做的是银染。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-12-30 20:20:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyj863

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-01-01 17:35:47
以前我们一直用这样的方法做，也是银染，只不过用341F-518R扩增，你换个扩增程序试试，特别是退火温度，是否可以降点，或者采用降落PCR策略。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-01-01 12:39:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白蜓er

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by uneei at 2011-12-30 20:20:40
你好，我今天刚刚才做了PCR，昨天切胶，用无菌水洗了两次，加入50微升的无菌水，无菌枪头捣碎，4℃过夜，今天吸取10微升做模板，做60微升体系的PCR，十几个样只有一个扩增效果还可以，其他的不是都二聚体就是只有一 ...

你好，老师我现在也遇到了你相同的问题，请问你解决了吗？究竟 是什么原因呀？
赞一下 回复此楼
7楼2015-04-24 19:57:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

南大微生物

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 白蜓er at 2015-04-24 19:57:53
你好，老师我现在也遇到了你相同的问题，请问你解决了吗？究竟 是什么原因呀？...

嘿嘿 直接做二代测序好了 嘿嘿
赞一下 回复此楼
8楼2015-04-24 23:36:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白蜓er

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 南大微生物 at 2015-04-24 23:36:14
嘿嘿 直接做二代测序好了 嘿嘿...

那如果我需要DGGE之后TA克隆测序的话，这个怎么搞嘞，请问你有没找到什么原因PCR扩增 不出来呀？
赞一下 回复此楼
9楼2015-04-25 11:20:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tama二等兵

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 白蜓er at 2015-04-25 11:20:56
那如果我需要DGGE之后TA克隆测序的话，这个怎么搞嘞，请问你有没找到什么原因PCR扩增 不出来呀？...

引物的问题？
回复此楼
10楼2015-06-12 13:13:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员18LpGo 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +30 xaw. 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 08:42 by Sammy2
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +12 振—TZ 2026-04-10 12/600 2026-04-12 07:54 by wj165256
[考研] 327求调剂 +5 拾光任染 2026-04-06 5/250 2026-04-12 02:29 by 秋豆菜芽
[考研] 材料与化工300求调剂 +39 肖开文 2026-04-09 43/2150 2026-04-12 01:30 by 秋豆菜芽
[考研] 一志愿厦大0856，306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
[考研] 调剂 +4 电气300求调剂不 2026-04-08 7/350 2026-04-11 10:44 by 紫曦紫棋
[考研] 293求调剂 +6 勇远库爱314 2026-04-08 6/300 2026-04-11 10:08 by zhq0425
[考研] 材料与化工调剂 +12 否极泰来2026 2026-04-10 13/650 2026-04-11 00:28 by wangjihu
[考研] 302分求调剂 +9 凡语祈愿 2026-04-08 10/500 2026-04-10 23:26 by 314126402
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 298求调剂 +13 钉叮咚冬瓜 2026-04-09 13/650 2026-04-10 15:49 by jiajinhpu
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +8 求上岸的小王 2026-04-10 8/400 2026-04-10 15:09 by hemengdong
[考研] 生物学求调剂 一志愿沪9，326分 +7 刘墨墨 2026-04-06 7/350 2026-04-10 08:11 by kangsm
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
[考研] 一志愿中科院105500专业总分315求调剂 +6 lallalh 2026-04-09 7/350 2026-04-09 17:51 by lallalh
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
[考研] 307求调剂 +14 超级伊昂大王 2026-04-06 14/700 2026-04-08 07:03 by 无际的草原
[考研] 22408 318分求调剂 +4 勤奋的小笼包 2026-04-06 6/300 2026-04-07 15:05 by 纸鹤555
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭