应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌引物 338F 518R 做DGGE之后 pcr
51/1返回列表
查看: 4823  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

@@xiaowu@@

铜虫 (初入文坛)

[求助] 细菌引物 338F 518R 做DGGE之后 pcr 已有1人参与

DGGE 之后 pcr 出来的有两条带 还不清晰 怎么回事呀 请大侠 帮分析一下

12



[ Last edited by @@xiaowu@@ on 2011-12-29 at 20:03 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-12-29 20:00:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyj863

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
rainwander(金币+3): 鼓励交流 2012-01-01 17:35:30
DGGE条带割下来后，是怎么制备PCR模板的，时间放置有多长，根据我的经验，DGGE条带割出来后放置时间长了会出现扩增得不到产物，涂抹带之类的情况。另外，扩增引物也是带了GC夹?是为了再跑一次DGGE，还是...  （我以前割单条DGGE带后无菌水冲洗，置于30ul无菌水中，无菌枪头捣碎，置于4°C 过夜，第二天取1ul液体扩增，效果很好。现在很多年没做过了，详细情况也有些忘记了）
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-12-30 11:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

liuyj863

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫，加油 2011-12-30 10:53:48
PCR两条带差的较大，感觉是PCR的问题，理论上说你DGGE上样样品是大小类似的DNA，问题说明有些太简单，不好分析原因，详细说说实验方法步骤，可能有助于解决你的问题。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-12-29 21:47:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

@@xiaowu@@

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by liuyj863 at 2011-12-29 21:47:24:
PCR两条带差的较大，感觉是PCR的问题，理论上说你DGGE上样样品是大小类似的DNA，问题说明有些太简单，不好分析原因，详细说说实验方法步骤，可能有助于解决你的问题。

带GC 的pcr产物挺亮的 DGGE跑完也很好
然后是pcr

10倍buffer 2.5
dntp  2.5
F与R 1
酶  0.25
模板 5
94 1min
60 1min
72 1min
35循环
赞一下 回复此楼
3楼2011-12-30 09:48:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uneei

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
zhang8826857(金币+3): 鼓励新虫 2011-12-30 21:18:36
引用回帖:
4楼: Originally posted by liuyj863 at 2011-12-30 11:27:39:
DGGE条带割下来后，是怎么制备PCR模板的，时间放置有多长，根据我的经验，DGGE条带割出来后放置时间长了会出现扩增得不到产物，涂抹带之类的情况。另外，扩增引物也是带了GC夹?是为了再跑一次DGGE，还是...  （我 ...

你好，我今天刚刚才做了PCR，昨天切胶，用无菌水洗了两次，加入50微升的无菌水，无菌枪头捣碎，4℃过夜，今天吸取10微升做模板，做60微升体系的PCR，十几个样只有一个扩增效果还可以，其他的不是都二聚体就是只有一点点很淡的条带，这是为什么啊？我的DGGE做的是银染。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-12-30 20:20:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +4 kotoko_ik 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:23 by 呆呆师姐
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +5 葵梓卫队 2026-03-18 7/350 2026-03-23 16:26 by lingjue
[考研] 316求调剂 +7 梁茜雯 2026-03-19 7/350 2026-03-23 16:21 by lingjue
[考研] 招08考数学 +6 laoshidan 2026-03-20 14/700 2026-03-23 14:37 by 15614359529
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 305分求调剂（食品工程） +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭