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Icityman

铁虫 (小有名气)


[交流] 关于PCR拖尾现象

PCR跑出来是这个现象,体系优化了不少次,梯度降落都做过了,还是这样,求高手帮忙解决,谢谢啊!!

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harben

银虫 (初入文坛)



Icityman(金币+1):谢谢参与
引物设计有问题,换引物是最好最快的选择
2楼2011-12-22 16:41:21
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Icityman

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by harben at 2011-12-22 16:41:21:
引物设计有问题,换引物是最好最快的选择

可是有拖尾不就是有克隆吗?
3楼2011-12-22 18:04:24
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
Icityman(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-12-23 23:44:29
你这不是叫拖尾,根本就没有你的目的条带,不知道你是以什么为模版p的,如果是菌液的话就提取质粒为模版再试试,如果是质粒或DNA的话尝试着稀释100倍-1000倍再P下试试,前提是确认你的引物没问题,要不就是克隆里没的你目的片段
4楼2011-12-22 19:19:35
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zhengli123

金虫 (小有名气)



Icityman(金币+1):谢谢参与
这也太严重了吧,怎么会在那么大的位置拖带呢,你的模板有问题
6楼2011-12-22 20:30:17
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qzhaiyan

木虫 (著名写手)



Icityman(金币+1):谢谢参与
这哪叫拖尾啊,压根没有P出来啊。
7楼2011-12-22 20:45:29
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普通回帖

yingying1588

木虫之王 (文学泰斗)



Icityman(金币+1):谢谢参与
重做吧。
5楼2011-12-22 20:22:43
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leimiao_hit

木虫之王 (文学泰斗)



Icityman(金币+1):谢谢参与
不是拖尾
8楼2011-12-22 20:55:12
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leimiao_hit

木虫之王 (文学泰斗)



Icityman(金币+1):谢谢参与
模板有问题
9楼2011-12-22 20:55:37
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neon_alone

木虫 (小有名气)



Icityman(金币+1):谢谢参与
我也 曾经出现过这样的问题,就是模板降解了,是CDNA P 的吗?
10楼2011-12-23 08:50:15
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wwb95599

铜虫 (小有名气)



Icityman(金币+1):谢谢参与
感觉没有P出来,不是体系的问题,应该是引物和模板的问题。建议楼主确认下引物是否有问题!
11楼2011-12-23 10:36:18
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diaoruiying

木虫 (著名写手)



Icityman(金币+1):谢谢参与
模板降解;从新提取模板DNA
12楼2011-12-23 12:26:12
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ellar

铜虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★ ★
Icityman(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+4): Good! 2011-12-23 23:45:01
pcr失败了 ,这非smear。建议阳性对照检验模板;检查引物特异性;三,分析目的基因GC含量,二级结构等,考虑用LA taq或KOD酶,或者体系加适量甘油或DMSO
13楼2011-12-23 22:12:40
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256k

新虫 (正式写手)



Icityman(金币+1):谢谢参与
楼上正解
14楼2011-12-23 22:16:42
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Icityman

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-12-22 19:19:35:
你这不是叫拖尾,根本就没有你的目的条带,不知道你是以什么为模版p的,如果是菌液的话就提取质粒为模版再试试,如果是质粒或DNA的话尝试着稀释100倍-1000倍再P下试试,前提是确认你的引物没问题,要不就是克隆里 ...

我用的都是师兄师姐留下来的DNA,浓度应该还好,我上次也检测了一下,没有降解
15楼2011-12-24 09:53:31
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Icityman

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
10楼: Originally posted by neon_alone at 2011-12-23 08:50:15:
我也 曾经出现过这样的问题,就是模板降解了,是CDNA P 的吗?

不是,是DNA
16楼2011-12-24 09:54:15
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Icityman

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
13楼: Originally posted by ellar at 2011-12-23 22:12:40:
pcr失败了 ,这非smear。建议阳性对照检验模板;检查引物特异性;三,分析目的基因GC含量,二级结构等,考虑用LA taq或KOD酶,或者体系加适量甘油或DMSO

我想请问一下,体系加甘油或DMSO起什么作用啊,而且加的量怎么控制呢
17楼2011-12-24 09:55:58
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liukun261

禁虫 (小有名气)


Icityman(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽

18楼2012-03-02 22:47:11
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fwks3518

木虫 (正式写手)



Icityman(金币+1):谢谢参与
请写出你的扩增条件,使用的模板情况等等,详细点才好帮你分析
19楼2012-03-03 09:19:22
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feng__

金虫 (著名写手)



Icityman(金币+1): 谢谢参与
模板有问题吧,跑下模板噻
20楼2012-05-16 11:03:07
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elbo

金虫 (小有名气)



Icityman(金币+1): 谢谢参与
模板出问题的可能性很大
21楼2012-05-17 07:34:22
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lihongyue328

新虫 (初入文坛)



Icityman(金币+1): 谢谢参与
亲,这不是拖尾哦,没有p出来目的条带
22楼2013-06-04 17:06:30
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没想好名字

新虫 (初入文坛)



Icityman(金币+1): 谢谢参与
这不是拖尾,因为压根就没有主条带。分析原因:1.模板分解了,且浓度过高2.引物的特异性太差3.退火温度过低,可采用Tm-10x5+Tm-2x30试试,并逐渐改变退火温度。
23楼2015-05-08 11:21:58
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mataomatao

禁虫 (正式写手)


Icityman(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

24楼2015-05-09 09:50:27
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