24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4927  |  回复: 23

Icityman

铁虫 (小有名气)


[交流] 关于PCR拖尾现象

PCR跑出来是这个现象,体系优化了不少次,梯度降落都做过了,还是这样,求高手帮忙解决,谢谢啊!!

1
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

harben

银虫 (初入文坛)



Icityman(金币+1):谢谢参与
引物设计有问题,换引物是最好最快的选择
2楼2011-12-22 16:41:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Icityman

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by harben at 2011-12-22 16:41:21:
引物设计有问题,换引物是最好最快的选择

可是有拖尾不就是有克隆吗?
3楼2011-12-22 18:04:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
Icityman(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-12-23 23:44:29
你这不是叫拖尾,根本就没有你的目的条带,不知道你是以什么为模版p的,如果是菌液的话就提取质粒为模版再试试,如果是质粒或DNA的话尝试着稀释100倍-1000倍再P下试试,前提是确认你的引物没问题,要不就是克隆里没的你目的片段
4楼2011-12-22 19:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhengli123

金虫 (小有名气)



Icityman(金币+1):谢谢参与
这也太严重了吧,怎么会在那么大的位置拖带呢,你的模板有问题
6楼2011-12-22 20:30:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qzhaiyan

木虫 (著名写手)



Icityman(金币+1):谢谢参与
这哪叫拖尾啊,压根没有P出来啊。
7楼2011-12-22 20:45:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

yingying1588

木虫之王 (文学泰斗)



Icityman(金币+1):谢谢参与
重做吧。
5楼2011-12-22 20:22:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leimiao_hit

木虫之王 (文学泰斗)



Icityman(金币+1):谢谢参与
不是拖尾
8楼2011-12-22 20:55:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leimiao_hit

木虫之王 (文学泰斗)



Icityman(金币+1):谢谢参与
模板有问题
9楼2011-12-22 20:55:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neon_alone

木虫 (小有名气)



Icityman(金币+1):谢谢参与
我也 曾经出现过这样的问题,就是模板降解了,是CDNA P 的吗?
10楼2011-12-23 08:50:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwb95599

铜虫 (小有名气)



Icityman(金币+1):谢谢参与
感觉没有P出来,不是体系的问题,应该是引物和模板的问题。建议楼主确认下引物是否有问题!
11楼2011-12-23 10:36:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

diaoruiying

木虫 (著名写手)



Icityman(金币+1):谢谢参与
模板降解;从新提取模板DNA
12楼2011-12-23 12:26:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ellar

铜虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★ ★
Icityman(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+4): Good! 2011-12-23 23:45:01
pcr失败了 ,这非smear。建议阳性对照检验模板;检查引物特异性;三,分析目的基因GC含量,二级结构等,考虑用LA taq或KOD酶,或者体系加适量甘油或DMSO
13楼2011-12-23 22:12:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

256k

新虫 (正式写手)



Icityman(金币+1):谢谢参与
楼上正解
14楼2011-12-23 22:16:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Icityman

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-12-22 19:19:35:
你这不是叫拖尾,根本就没有你的目的条带,不知道你是以什么为模版p的,如果是菌液的话就提取质粒为模版再试试,如果是质粒或DNA的话尝试着稀释100倍-1000倍再P下试试,前提是确认你的引物没问题,要不就是克隆里 ...

我用的都是师兄师姐留下来的DNA,浓度应该还好,我上次也检测了一下,没有降解
15楼2011-12-24 09:53:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Icityman

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
10楼: Originally posted by neon_alone at 2011-12-23 08:50:15:
我也 曾经出现过这样的问题,就是模板降解了,是CDNA P 的吗?

不是,是DNA
16楼2011-12-24 09:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Icityman

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
13楼: Originally posted by ellar at 2011-12-23 22:12:40:
pcr失败了 ,这非smear。建议阳性对照检验模板;检查引物特异性;三,分析目的基因GC含量,二级结构等,考虑用LA taq或KOD酶,或者体系加适量甘油或DMSO

我想请问一下,体系加甘油或DMSO起什么作用啊,而且加的量怎么控制呢
17楼2011-12-24 09:55:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukun261

禁虫 (小有名气)


Icityman(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽

18楼2012-03-02 22:47:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fwks3518

木虫 (正式写手)



Icityman(金币+1):谢谢参与
请写出你的扩增条件,使用的模板情况等等,详细点才好帮你分析
19楼2012-03-03 09:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feng__

金虫 (著名写手)



Icityman(金币+1): 谢谢参与
模板有问题吧,跑下模板噻
20楼2012-05-16 11:03:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)



Icityman(金币+1): 谢谢参与
模板出问题的可能性很大
21楼2012-05-17 07:34:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihongyue328

新虫 (初入文坛)



Icityman(金币+1): 谢谢参与
亲,这不是拖尾哦,没有p出来目的条带
22楼2013-06-04 17:06:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

没想好名字

新虫 (初入文坛)



Icityman(金币+1): 谢谢参与
这不是拖尾,因为压根就没有主条带。分析原因:1.模板分解了,且浓度过高2.引物的特异性太差3.退火温度过低,可采用Tm-10x5+Tm-2x30试试,并逐渐改变退火温度。
23楼2015-05-08 11:21:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mataomatao

禁虫 (正式写手)


Icityman(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽

24楼2015-05-09 09:50:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Icityman 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿西北工业大学289 085602 +32 yang婷 2026-04-10 33/1650 2026-04-12 02:41 by 秋豆菜芽
[考研] 291求调剂 +7 关忆北. 2026-04-11 7/350 2026-04-11 23:48 by baobaoye
[考研] 269求调剂 +11 啊啊我我 2026-04-07 11/550 2026-04-11 16:45 by vgtyfty
[考研] 274求调剂求调剂 +11 Jachenbingoo 2026-04-06 14/700 2026-04-11 11:37 by 紫曦紫棋
[考研] 工科273调剂 +6 X1999 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:23 by zhq0425
[材料工程] 材料调剂推荐 +8 蛋糕x2 2026-04-07 8/400 2026-04-10 23:13 by Ftglcn90
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 材料复试求调剂 +20 xhhdjdjsjks 2026-04-09 20/1000 2026-04-10 10:25 by 孙小小12457
[考研] 材料专硕调剂 +16 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 17/850 2026-04-09 21:16 by wutongshun
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +10 池池池池池池 2026-04-08 10/500 2026-04-09 17:10 by 独醉梦孤城
[考研] 085404,334分,求调剂 +5 sunjie8888 2026-04-08 8/400 2026-04-09 07:26 by sunjie8888
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
[考研] 264求调剂 +11 麦小叮当 2026-04-07 11/550 2026-04-08 16:05 by 一只好果子?
[考研] 求考研材料调剂 +3 材化李可 2026-04-07 3/150 2026-04-08 00:21 by JourneyLucky
[考研] 软工学硕299求调剂 +6 useryy 2026-04-07 6/300 2026-04-07 09:50 by vgtyfty
[考研] 327考研调剂推荐 +6 呜呜呜呜呢 2026-04-06 6/300 2026-04-06 21:39 by 啵啵啵0119
[考研] 307求调剂 +3 所念及所望 2026-04-06 3/150 2026-04-06 17:30 by 土木硕士招生
[考研] 求调剂 +10 chenxrlkx 2026-04-05 10/500 2026-04-06 11:31 by 猪会飞
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:07 by 啵啵啵0119
[考研] 322求调剂 +3 嗯哼哼恒 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:52 by nepu_uu
信息提示
请填处理意见