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Icityman

铁虫 (小有名气)


[交流] 关于PCR拖尾现象

PCR跑出来是这个现象,体系优化了不少次,梯度降落都做过了,还是这样,求高手帮忙解决,谢谢啊!!

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Icityman

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by harben at 2011-12-22 16:41:21:
引物设计有问题,换引物是最好最快的选择

可是有拖尾不就是有克隆吗?
3楼2011-12-22 18:04:24
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Icityman

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-12-22 19:19:35:
你这不是叫拖尾,根本就没有你的目的条带,不知道你是以什么为模版p的,如果是菌液的话就提取质粒为模版再试试,如果是质粒或DNA的话尝试着稀释100倍-1000倍再P下试试,前提是确认你的引物没问题,要不就是克隆里 ...

我用的都是师兄师姐留下来的DNA,浓度应该还好,我上次也检测了一下,没有降解
15楼2011-12-24 09:53:31
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Icityman

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
10楼: Originally posted by neon_alone at 2011-12-23 08:50:15:
我也 曾经出现过这样的问题,就是模板降解了,是CDNA P 的吗?

不是,是DNA
16楼2011-12-24 09:54:15
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引用回帖:
13楼: Originally posted by ellar at 2011-12-23 22:12:40:
pcr失败了 ,这非smear。建议阳性对照检验模板;检查引物特异性;三,分析目的基因GC含量,二级结构等,考虑用LA taq或KOD酶,或者体系加适量甘油或DMSO

我想请问一下,体系加甘油或DMSO起什么作用啊,而且加的量怎么控制呢
17楼2011-12-24 09:55:58
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