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Icityman

铁虫 (小有名气)

[交流] 关于PCR拖尾现象

PCR跑出来是这个现象，体系优化了不少次，梯度降落都做过了，还是这样，求高手帮忙解决，谢谢啊！！

1
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1楼 2011-12-22 16:37:46
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

harben

银虫 (初入文坛)
★
Icityman(金币+1):谢谢参与
引物设计有问题，换引物是最好最快的选择
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2楼2011-12-22 16:41:21
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Icityman

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by harben at 2011-12-22 16:41:21:
引物设计有问题，换引物是最好最快的选择

可是有拖尾不就是有克隆吗？
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3楼2011-12-22 18:04:24
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
Icityman(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-12-23 23:44:29
你这不是叫拖尾，根本就没有你的目的条带，不知道你是以什么为模版p的，如果是菌液的话就提取质粒为模版再试试，如果是质粒或DNA的话尝试着稀释100倍-1000倍再P下试试，前提是确认你的引物没问题，要不就是克隆里没的你目的片段
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4楼2011-12-22 19:19:35
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zhengli123

金虫 (小有名气)
★
Icityman(金币+1):谢谢参与
这也太严重了吧，怎么会在那么大的位置拖带呢，你的模板有问题
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6楼2011-12-22 20:30:17
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qzhaiyan

木虫 (著名写手)
★
Icityman(金币+1):谢谢参与
这哪叫拖尾啊，压根没有P出来啊。
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7楼2011-12-22 20:45:29
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普通回帖

yingying1588

木虫之王 (文学泰斗)
★
Icityman(金币+1):谢谢参与
重做吧。
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5楼2011-12-22 20:22:43
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leimiao_hit

木虫之王 (文学泰斗)
★
Icityman(金币+1):谢谢参与
不是拖尾
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8楼2011-12-22 20:55:12
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leimiao_hit

木虫之王 (文学泰斗)
★
Icityman(金币+1):谢谢参与
模板有问题
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9楼2011-12-22 20:55:37
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neon_alone

木虫 (小有名气)
★
Icityman(金币+1):谢谢参与
我也 曾经出现过这样的问题，就是模板降解了，是CDNA P 的吗？
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10楼2011-12-23 08:50:15
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wwb95599

铜虫 (小有名气)
★
Icityman(金币+1):谢谢参与
感觉没有P出来，不是体系的问题，应该是引物和模板的问题。建议楼主确认下引物是否有问题！
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11楼2011-12-23 10:36:18
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diaoruiying

木虫 (著名写手)
★
Icityman(金币+1):谢谢参与
模板降解；从新提取模板DNA
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12楼2011-12-23 12:26:12
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ellar

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
Icityman(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+4): Good! 2011-12-23 23:45:01
pcr失败了 ，这非smear。建议阳性对照检验模板；检查引物特异性；三，分析目的基因GC含量，二级结构等，考虑用LA taq或KOD酶，或者体系加适量甘油或DMSO
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13楼2011-12-23 22:12:40
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256k

新虫 (正式写手)
★
Icityman(金币+1):谢谢参与
楼上正解
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14楼2011-12-23 22:16:42
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Icityman

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-12-22 19:19:35:
你这不是叫拖尾，根本就没有你的目的条带，不知道你是以什么为模版p的，如果是菌液的话就提取质粒为模版再试试，如果是质粒或DNA的话尝试着稀释100倍-1000倍再P下试试，前提是确认你的引物没问题，要不就是克隆里 ...

我用的都是师兄师姐留下来的DNA，浓度应该还好，我上次也检测了一下，没有降解
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15楼2011-12-24 09:53:31
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Icityman

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by neon_alone at 2011-12-23 08:50:15:
我也 曾经出现过这样的问题，就是模板降解了，是CDNA P 的吗？

不是，是DNA
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16楼2011-12-24 09:54:15
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Icityman

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by ellar at 2011-12-23 22:12:40:
pcr失败了 ，这非smear。建议阳性对照检验模板；检查引物特异性；三，分析目的基因GC含量，二级结构等，考虑用LA taq或KOD酶，或者体系加适量甘油或DMSO

我想请问一下，体系加甘油或DMSO起什么作用啊，而且加的量怎么控制呢
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17楼2011-12-24 09:55:58
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liukun261

禁虫 (小有名气)
★
Icityman(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
18楼2012-03-02 22:47:11
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fwks3518

木虫 (正式写手)
★
Icityman(金币+1):谢谢参与
请写出你的扩增条件，使用的模板情况等等，详细点才好帮你分析
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19楼2012-03-03 09:19:22
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feng__

金虫 (著名写手)
★
Icityman(金币+1): 谢谢参与
模板有问题吧，跑下模板噻
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20楼2012-05-16 11:03:07
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elbo

金虫 (小有名气)
★
Icityman(金币+1): 谢谢参与
模板出问题的可能性很大
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21楼2012-05-17 07:34:22
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lihongyue328

新虫 (初入文坛)
★
Icityman(金币+1): 谢谢参与
亲，这不是拖尾哦，没有p出来目的条带
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22楼2013-06-04 17:06:30
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没想好名字

新虫 (初入文坛)
★
Icityman(金币+1): 谢谢参与
这不是拖尾，因为压根就没有主条带。分析原因：1.模板分解了，且浓度过高2.引物的特异性太差3.退火温度过低，可采用Tm-10x5+Tm-2x30试试，并逐渐改变退火温度。
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23楼2015-05-08 11:21:58
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
★
Icityman(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
24楼2015-05-09 09:50:27
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