| 查看: 866 | 回复: 1 | |||
[求助]
求如何反转录3-4k的大片段
|
|
求指教！！！ 我做的是CPV病毒，其基因组为dsRNA，所以要反转录才可以拿到dsDNA。因为其基因组很特殊，为10个大小不一的dsRNA片段，所以只要将基因组跑电泳然后割胶回收就可拿到某一特定的dsRNA片段，然后做反转录。但是因为片段太长（分别为3.2k 4.3k.4.8k），总是出来一个1.5k的片段。然后认为问题出在模板浓度太低，所以将CPV病毒感染宿主，然后提取总RNA，其中亦必然包含大量的病毒mRNA，然后再反转录，还是不成功。但是若是分段克隆的话（在基因序列中间设计引物，上下游各2k的片段分别克隆），即还是以上述病毒感染宿主后提取的总RNA为模板，就能克隆到特异性很好的片段。但是没法将两个片段连接起来，所以求能够一次性将3k以上片段克隆出来的方法。 多谢！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有170人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【求助】pdf文档所占内存太大的问题
已经有4人回复
- 求助各位大侠：
已经有6人回复
- 第一次发帖，第一次遇到如此大的事情，散去所有金币，求帮助。。。
已经有38人回复
- 求问-武汉地区-哪儿有做-红外-用的大点的压片工具啊？
已经有5人回复
- 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建
已经有46人回复
- 求翻译一个会议的名字 （日本大气环境学会北陆支会）
已经有1人回复
- 想设计siRNA片段，寻求帮助，懂这方面设计的朋友，请进，谢谢！
已经有17人回复
- 寻找带有目的基因的DNA片段
已经有9人回复
- 克隆大片段的序列如何设计引物
已经有4人回复
- 请问能不能仅克隆单一基因的一小片段
已经有4人回复
- 反转录高手进来~~
已经有8人回复
- DNA片段经过酶切后的粘性末端怎么磨平？
已经有15人回复
- 【求助/交流】反转录时反应体系可以有多大
已经有6人回复
- 【求助/交流】反转录时该选用oligo dT还是 随机6引物？
已经有9人回复
- 【求助/交流】如何跑胶才能将两个大片段跑开
已经有10人回复
- 【求助】如何写护理论文
已经有13人回复
- 【求助/交流】请教RNA二级结构对反转录的影响
已经有14人回复
- 【求助/交流】跪求反转录失败的原因
已经有16人回复
blackrose8089
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 16
- 应助: 100 (初中生)
- 贵宾: 0.11
- 金币: 10639.6
- 散金: 155
- 红花: 30
- 沙发: 6
- 帖子: 3703
- 在线: 790.4小时
- 虫号: 614948
- 注册: 2008-09-28
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
2楼2011-11-24 19:32:09
20