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lxjwishes

银虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】如何跑胶才能将两个大片段跑开

做了个PCR 扩出来的是两个大小很相近的两条带
2300和2200bp
想切胶分开
但是很难
请问有什么好办法么？

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1楼 2011-01-06 18:02:22

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wyg888

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★ ★ ★
lxjwishes(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2):谢谢交流 2011-01-07 09:54:05

胶的浓度越大对于短片段DNA分离性能越好，而浓度越小，越利于长片段的分离；还有就是控制电压和跑胶的时间

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6楼2011-01-07 08:18:10

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最爱花诗雨

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★ ★ ★
lxjwishes(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+2):鼓励交流 2011-01-06 21:18:37

胶的浓度越大对于短片段DNA分离性能越好，而浓度越小，越利于长片段的分离；还有就是控制电压和跑胶的时间。
另外，对于眼睛能分开的100bp大小的胶，割胶回收时还是有难度的，能不能改进实验方案呢？

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2楼2011-01-06 18:15:04

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zqt123_1981

木虫 (小有名气)

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★
lxjwishes(金币+1):谢谢参与

聚丙烯酰胺电泳试试

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3楼2011-01-06 18:29:16

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★
lxjwishes(金币+1):谢谢参与

有点难度，如果跑的时间长了，条带会扩散的。

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4楼2011-01-06 19:41:33

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xueyaqiang

新虫 (初入文坛)

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★
lxjwishes(金币+1):谢谢参与

用浓度大的TBE琼脂糖胶慢慢跑。

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5楼2011-01-06 21:30:49

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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

★
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几乎不可能，连T载体吧

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7楼2011-01-07 08:28:28

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gongeleven

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★
lxjwishes(金币+1):谢谢参与

如果是作为insert的话，一起连接吧，然后设计个引物就能区分

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8楼2011-01-07 08:57:24

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rosalie161

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★
lxjwishes(金币+1):谢谢参与

水平电泳恐怕不行，用垂直的吧。

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9楼2011-01-07 09:06:18

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yanfeier

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★
lxjwishes(金币+1):谢谢参与

用脉冲场电泳试试

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10楼2011-01-07 10:28:53

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langduiyue

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★ ★ ★
lxjwishes(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2):鼓励分享自己的经验~~~希望优化后分离效果更好，并且能再与大家分享你成功的经验~~~ 2011-01-07 21:30:09

加大上样量，加大胶的长度，把电压降到最低：5V/CM。我也跑电泳，片段大小120-350之间，共九个片段，片段相差多说为20bp。现在是能分清了。但是还是不太清楚。优化中。

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11楼2011-01-07 11:59:11

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