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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为啥western有这么多条带
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lixingliang

新虫 (小有名气)

[交流] 为啥western有这么多条带 已有14人参与

我的实验流程是：先扩增带有Flag标签的基因，再转进293T细胞进行表达，然后做western验证蛋白表达情况，用的是Flag标签抗体，是单抗，所以很困惑，希望大家帮忙解答，谢谢。图一是目的蛋白，图二是内参GAPDH




PS：我的目的蛋白是入核蛋白

[ Last edited by lixingliang on 2011-11-8 at 23:22 ]
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我不管你看起看不起我，我都是个演员
1楼 2011-11-08 09:47:15
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★ ★ ★
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wanhscn(金币+2): 鼓励交流！ 2011-11-08 11:34:26
表达的蛋白大小不一，出现复合物或是部分降解，都能和单抗作用，于是…………
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金币是赌出来的
2楼2011-11-08 09:58:34
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丙氨酸密码子

新虫 (小有名气)
诡异，，
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3楼2011-11-08 10:02:25
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lixingliang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wjswj at 2011-11-08 09:58:34:
表达的蛋白大小不一，出现复合物或是部分降解，都能和单抗作用，于是…………

一个基因难道可以表达多种蛋白吗？这种可能性有多大呢，请指教
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我不管你看起看不起我，我都是个演员
4楼2011-11-08 11:55:03
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mascotte

金虫 (正式写手)
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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-11-08 20:16:52
不知道你的蛋白是什么。蛋白在细胞浆表达以后，是需要进行再加工的，这个蛋白叫做前体蛋白。该蛋白如果有入核信号或者膜定位信号或者线粒体定位信号就可以定位到相应的区域去，定位以后这些定位信号会被切除，成为成熟蛋白。如果蛋白在信号通路中被激活，被切割或被磷酸化等等，蛋白的分子量还会发生变化。所以如果不是抗体的问题（通常FLag抗体的特异性应该是不错的），这些条带可能和蛋白的功能相关。
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5楼2011-11-08 12:16:28
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凡子1985

银虫 (小有名气)
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amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2011-11-08 20:17:01
加未转染的细胞样做对照，看你的结果里还是有一条最亮的，不要想的太复杂，只可能是系统问题，不能是蛋白本身问题，western多么经典的实验啊
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6楼2011-11-08 17:05:53
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Rubisco580

金虫 (小有名气)
★
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一抗的好坏也很重要的。据说一抗用牛奶配制，杂带会少点。就是封闭用的牛奶。
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7楼2011-11-08 17:08:36
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foreverjohn

金虫 (小有名气)
★
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可能是翻译后修饰哦，如磷酸化，或者糖基化等
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8楼2011-11-08 18:03:38
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lixingliang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by mascotte at 2011-11-08 12:16:28:
不知道你的蛋白是什么。蛋白在细胞浆表达以后，是需要进行再加工的，这个蛋白叫做前体蛋白。该蛋白如果有入核信号或者膜定位信号或者线粒体定位信号就可以定位到相应的区域去，定位以后这些定位信号会被切除，成为 ...

谢谢啊
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我不管你看起看不起我，我都是个演员
9楼2011-11-08 23:20:02
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helloluke

铁虫 (初入文坛)
★
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一个基因当然可以表达多种蛋白。。比如病毒  所以要看你是什么基因咯 是单顺反子还是多顺反子
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10楼2011-11-09 00:23:59
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