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lilixyong

新虫 (小有名气)

No venture,no gain.
11楼2011-11-09 08:48:52
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zaasyangyong

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
这种情况我觉得蛮正常的,我曾经都作出过像考染一样的结果。有多种原因能导致这样的结果,首先是体系的问题,蛋白量过大,很多抗体都会杂出非特异性的条带,就是目的条带亮度最大,这时可以适当降低上样量,抗体的特异性也可能会造成这样的结果,但是应该不是主要的。还有就是蛋白本身的问题,比如磷酸化、降解、前体的不同剪切等等。

[ Last edited by zaasyangyong on 2011-11-9 at 08:53 ]
算了
12楼2011-11-09 08:52:16
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程晶静

新虫 (初入文坛)

坚持,加油
13楼2011-11-09 09:16:39
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lixingliang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by zaasyangyong at 2011-11-09 08:52:16:
这种情况我觉得蛮正常的,我曾经都作出过像考染一样的结果。有多种原因能导致这样的结果,首先是体系的问题,蛋白量过大,很多抗体都会杂出非特异性的条带,就是目的条带亮度最大,这时可以适当降低上样量,抗体的 ...

有可能,我在尝试一次
谢谢啊
我不管你看起看不起我,我都是个演员
14楼2011-11-09 10:19:29
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shenyang24

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
出现多带的情况
1 细胞传代次数过多,蛋白表达不同
2 体内表达的蛋白样本具有多种修饰形式如乙酰化,甲基化,烷基化,磷酸化等,
3 蛋白样本降解(蛋白质分子量降低)
15楼2011-11-09 11:00:02
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爱上大眼睛

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
western 本来就会显示很多条带,要把握显色的时间,一般是目的条带最先显示,目的条带显示之后要快速终止显示。
16楼2011-11-09 11:17:06
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lixingliang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 爱上大眼睛 at 2011-11-09 11:17:06:
western 本来就会显示很多条带,要把握显色的时间,一般是目的条带最先显示,目的条带显示之后要快速终止显示。

下次我试一下
我不管你看起看不起我,我都是个演员
17楼2011-11-10 22:18:59
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lijunhu

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
转膜的时候出问题了,估计是夹子松动
18楼2011-11-10 23:15:01
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passer-by林

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3619796楼: Originally posted by lixingliang at 2011-11-08 09:47:15
我的实验流程是:先扩增带有Flag标签的基因,再转进293T细胞进行表达,然后做western验证蛋白表达情况,用的是Flag标签抗体,是单抗,所以很困惑,希望大家帮忙解答,谢谢。图一是目的蛋白,图二是内参GAPDH
cf/16 ...

目的蛋白的特异性不强
19楼2012-07-30 15:59:52
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