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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为啥western有这么多条带
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lilixyong

新虫 (小有名气)
呵呵
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No venture,no gain.
11楼2011-11-09 08:48:52
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zaasyangyong

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
这种情况我觉得蛮正常的，我曾经都作出过像考染一样的结果。有多种原因能导致这样的结果，首先是体系的问题，蛋白量过大，很多抗体都会杂出非特异性的条带，就是目的条带亮度最大，这时可以适当降低上样量，抗体的特异性也可能会造成这样的结果，但是应该不是主要的。还有就是蛋白本身的问题，比如磷酸化、降解、前体的不同剪切等等。

[ Last edited by zaasyangyong on 2011-11-9 at 08:53 ]
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算了
12楼2011-11-09 08:52:16
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程晶静

新虫 (初入文坛)
坚持，加油
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13楼2011-11-09 09:16:39
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lixingliang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by zaasyangyong at 2011-11-09 08:52:16:
这种情况我觉得蛮正常的，我曾经都作出过像考染一样的结果。有多种原因能导致这样的结果，首先是体系的问题，蛋白量过大，很多抗体都会杂出非特异性的条带，就是目的条带亮度最大，这时可以适当降低上样量，抗体的 ...

有可能，我在尝试一次
谢谢啊
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我不管你看起看不起我，我都是个演员
14楼2011-11-09 10:19:29
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shenyang24

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
出现多带的情况
1 细胞传代次数过多，蛋白表达不同
2 体内表达的蛋白样本具有多种修饰形式如乙酰化，甲基化，烷基化，磷酸化等，
3 蛋白样本降解（蛋白质分子量降低）
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15楼2011-11-09 11:00:02
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爱上大眼睛

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
western 本来就会显示很多条带，要把握显色的时间，一般是目的条带最先显示，目的条带显示之后要快速终止显示。
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16楼2011-11-09 11:17:06
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lixingliang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 爱上大眼睛 at 2011-11-09 11:17:06:
western 本来就会显示很多条带，要把握显色的时间，一般是目的条带最先显示，目的条带显示之后要快速终止显示。

下次我试一下
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我不管你看起看不起我，我都是个演员
17楼2011-11-10 22:18:59
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lijunhu

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
转膜的时候出问题了，估计是夹子松动
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18楼2011-11-10 23:15:01
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passer-by林

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3619796楼: Originally posted by lixingliang at 2011-11-08 09:47:15
我的实验流程是：先扩增带有Flag标签的基因，再转进293T细胞进行表达，然后做western验证蛋白表达情况，用的是Flag标签抗体，是单抗，所以很困惑，希望大家帮忙解答，谢谢。图一是目的蛋白，图二是内参GAPDH
cf/16 ...

目的蛋白的特异性不强
赞一下 回复此楼
19楼2012-07-30 15:59:52
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