应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】表达载体pCAMBIA1304表达顺序看不懂
131/2返回列表12下一页
查看: 4597  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

叮叮0504

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助/交流】表达载体pCAMBIA1304表达顺序看不懂

怎么有2个35S启动子啊，一个方向向左，一个方向向右，我在多克隆位点上插入了我的目的基因，报告基因GFP和GUS还会表达么，新人在线等，急啊，如果发帖不规范，版主大人大量

1304质粒图
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-03 20:11:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good！ 2011-11-09 12:19:25
引用回帖:
5楼: Originally posted by 荒寒落寞 at 2011-11-09 01:11:00:
我插入的是ORF，应该能表达，我关心的是插入在NCO和SPE之间，GFP还表达么，先不弄融合蛋白

1.先搞清楚“GFP表达”是什么意思！转录和翻译都可叫做表达。
2.是的，应该将基因插入Nco和SpeI之间。其二，必须将你的基因的ORF与GFP构建成融合蛋白，GFP才能发光。
3.否则（发生移码），即使GFP能够转录，GFP蛋白翻译不出来。故不能发光。
赞一下(3人) 回复此楼
6楼2011-11-09 08:32:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 分析得很好！ 2011-11-06 21:53:33
载体图没什么问题。你插入外源基因不会影响gus和gfp的表达，因为这两个基因在启动子后面，没有受到外源基因的影响；但是，你插入外源基因能不能表达要看你载体构建的情况，如果你仅仅转入一个外源基因，理论上是不能表达的，如果你转入的是一个完整的表达框，可能会正常表达。
赞一下(2人) 回复此楼
转向地质微生物学
2楼2011-11-06 19:35:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzz119

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-11-06 21:53:42
两个启动是启动表达两个不同方向的基因，不会影响GUS和GFP的表达，多克隆位点插入的基因在有操纵子的情况下会表达。。。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-11-06 20:50:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

荒寒落寞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lixg at 2011-11-09 08:32:13:
1.先搞清楚“GFP表达”是什么意思！转录和翻译都可叫做表达。
2.是的，应该将基因插入Nco和SpeI之间。其二，必须将你的基因的ORF与GFP构建成融合蛋白，GFP才能发光。
3.否则（发生移码），即使GFP能够转录，GF ...

额，还是不明白啊，GFP是荧光蛋白，虽然我知道只有构建目的蛋白和GFP融合蛋白才能定位，但是如果我把目的基因插入到NCO和SPE之间，GFP和GUS还会检测到么，不会移码吧，GFP自带起始密码子ATG
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-11-09 13:25:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

荒寒落寞

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励上图 2011-11-09 12:18:29
引用回帖:
3楼: Originally posted by zzz119 at 2011-11-06 20:50:16:
两个启动是启动表达两个不同方向的基因，不会影响GUS和GFP的表达，多克隆位点插入的基因在有操纵子的情况下会表达。。。

我看有的毕业论文，插入的是多克隆位点NCOI和SPEI之间，不在MCS之间啊
还有载体的左边缘，和右边缘问题，有的载体是左边R-BORDER，这个左边是T-BORDER
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-11-09 01:08:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

荒寒落寞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zzz119 at 2011-11-06 20:50:16:
两个启动是启动表达两个不同方向的基因，不会影响GUS和GFP的表达，多克隆位点插入的基因在有操纵子的情况下会表达。。。

我插入的是ORF，应该能表达，我关心的是插入在NCO和SPE之间，GFP还表达么，先不弄融合蛋白
赞一下 回复此楼
5楼2011-11-09 01:11:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

荒寒落寞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lixg at 2011-11-09 08:32:13:
1.先搞清楚“GFP表达”是什么意思！转录和翻译都可叫做表达。
2.是的，应该将基因插入Nco和SpeI之间。其二，必须将你的基因的ORF与GFP构建成融合蛋白，GFP才能发光。
3.否则（发生移码），即使GFP能够转录，GF ...

总之一句话，没有构建融合蛋白的情况下，GFP和GUS会翻译表达么
赞一下 回复此楼
8楼2011-11-09 13:29:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

madengyu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
9楼2011-11-09 13:49:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingling0629

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我现在也准备做GFP融合基因表达做蛋白的亚细胞定位，也是一位新手，我现在遇到的问题是PCAMBIA1304这个载体上的很多常用的克隆位点我基因里面都有，像XbaI、KpnI、EcoRI、speI、HindIII，我该怎么办呢？这个载体我还能用吗？如果这个载体不能用话，有哪位大哥大姐能告诉我有哪个载体我能用呢？？？感激不尽啊
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-14 20:49:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 叮叮0504 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 8rmuugja8q 2026-02-22 8/400 2026-02-23 12:22 by alian_214
[基金申请] 体制内长辈说体制内绝大部分一辈子在底层，如同你们一样大部分普通教师忙且收入低 +10 瞬息宇宙 2026-02-20 13/650 2026-02-23 11:23 by holypower
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 khieu8v8m0 2026-02-22 8/400 2026-02-23 09:35 by w4l55oybr1
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 khieu8v8m0 2026-02-22 8/400 2026-02-23 09:29 by w4l55oybr1
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +5 usprnugpzw 2026-02-21 11/550 2026-02-23 09:24 by w4l55oybr1
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 khieu8v8m0 2026-02-22 6/300 2026-02-23 07:59 by w4l55oybr1
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +6 3dfhjxgsh7 2026-02-22 9/450 2026-02-23 07:49 by w4l55oybr1
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 khieu8v8m0 2026-02-22 4/200 2026-02-23 06:46 by jsjzfl
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 khieu8v8m0 2026-02-22 5/250 2026-02-23 06:29 by w4l55oybr1
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 khieu8v8m0 2026-02-22 8/400 2026-02-23 06:24 by w4l55oybr1
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +5 3dfhjxgsh7 2026-02-22 6/300 2026-02-23 02:04 by 5jlh3qtdvx
[教师之家] 版面费该交吗 +7 苹果在哪里 2026-02-22 8/400 2026-02-22 22:37 by otani
[基金申请] 面上可以超过30页吧？ +4 阿拉贡aragon 2026-02-22 4/200 2026-02-22 21:22 by 山西悬空寺空悬�
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 usprnugpzw 2026-02-21 6/300 2026-02-22 19:48 by w89i99eaeh
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 3dfhjxgsh7 2026-02-22 4/200 2026-02-22 16:52 by khieu8v8m0
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 usprnugpzw 2026-02-22 3/150 2026-02-22 16:37 by khieu8v8m0
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 usprnugpzw 2026-02-21 4/200 2026-02-22 16:27 by khieu8v8m0
[基金申请] “人文社科而论，许多学术研究还没有达到民国时期的水平” +4 苏东坡二世 2026-02-18 5/250 2026-02-22 16:07 by liangep1573
[基金申请] 什么是人一生最重要的？ +4 瞬息宇宙 2026-02-21 4/200 2026-02-22 11:44 by huagongfeihu
[基金申请] 今年春晚有几个节目很不错，点赞！ +11 瞬息宇宙 2026-02-16 12/600 2026-02-21 21:14 by lq493392203
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭