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叮叮0504

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助/交流】表达载体pCAMBIA1304表达顺序看不懂

怎么有2个35S启动子啊,一个方向向左,一个方向向右,我在多克隆位点上插入了我的目的基因,报告基因GFP和GUS还会表达么,新人在线等,急啊,如果发帖不规范,版主大人大量

1304质粒图
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good! 2011-11-09 12:19:25
引用回帖:
5楼: Originally posted by 荒寒落寞 at 2011-11-09 01:11:00:
我插入的是ORF,应该能表达,我关心的是插入在NCO和SPE之间,GFP还表达么,先不弄融合蛋白

1.先搞清楚“GFP表达”是什么意思!转录和翻译都可叫做表达。
2.是的,应该将基因插入Nco和SpeI之间。其二,必须将你的基因的ORF与GFP构建成融合蛋白,GFP才能发光。
3.否则(发生移码),即使GFP能够转录,GFP蛋白翻译不出来。故不能发光。
6楼2011-11-09 08:32:13
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 分析得很好! 2011-11-06 21:53:33
载体图没什么问题。你插入外源基因不会影响gus和gfp的表达,因为这两个基因在启动子后面,没有受到外源基因的影响;但是,你插入外源基因能不能表达要看你载体构建的情况,如果你仅仅转入一个外源基因,理论上是不能表达的,如果你转入的是一个完整的表达框,可能会正常表达。
转向地质微生物学
2楼2011-11-06 19:35:19
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zzz119

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-11-06 21:53:42
两个启动是启动表达两个不同方向的基因,不会影响GUS和GFP的表达,多克隆位点插入的基因在有操纵子的情况下会表达。。。
3楼2011-11-06 20:50:16
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荒寒落寞

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励上图 2011-11-09 12:18:29
引用回帖:
3楼: Originally posted by zzz119 at 2011-11-06 20:50:16:
两个启动是启动表达两个不同方向的基因,不会影响GUS和GFP的表达,多克隆位点插入的基因在有操纵子的情况下会表达。。。

我看有的毕业论文,插入的是多克隆位点NCOI和SPEI之间,不在MCS之间啊
还有载体的左边缘,和右边缘问题,有的载体是左边R-BORDER,这个左边是T-BORDER


4楼2011-11-09 01:08:05
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