应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 亚细胞定位。。。
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 2750  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yangjianchen

铜虫 (小有名气)

[求助] 亚细胞定位。。。

请问在构建亚细胞定位载体时，要通过PCR扩增目的基因终止密码子之前的序列用于构建融合蛋白，我有两个问题想请教：
1，ATG（起始密码子）之前的一些序列（约几十bp）连到载体上对结果有没有影响？
2，若终止密码子前的序列GC含量高，二级结构有些复杂，设计引物扩增存在一定的困难，可否有其他解决途径去获得用于够载体的序列？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

学习的

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-19 20:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-20 11:31:43
yangjianchen: 金币+3, ★有帮助 2013-08-20 16:13:09
不知道你reporter放在N 还是C端。放在N端那么1就有问题，放在C端1就没有问题。
如果放在reporter放在N端，PCR primer 可以设提到终止密码子以后，不影响定位和表达。如果放在C端，直接设计，PCR的时候加DMSO，看是否可行。
赞一下(1人) 回复此楼
Let'sdoit.
2楼2013-08-19 21:49:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-20 11:31:51
yangjianchen: 金币+5, ★有帮助 2013-08-20 16:13:24
关于问题1，如果你使用载体本身ATG的话就可能有问题，因为你做定位，N端可能存在信号肽，你加入ATG前面序列，而你载体本身也有ATG就麻烦了，同时你也要考虑载体ATG与你基因ATG直接的序列。
问题2， 你所谓的GC有多高？我用过近80%的GC引物，都没有问题。Good luck！
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yangjianchen
互助互励，共奋共进！！
3楼2013-08-19 22:05:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-19 22:05:14
关于问题1，如果你使用载体本身ATG的话就可能有问题，因为你做定位，N端可能存在信号肽，你加入ATG前面序列，而你载体本身也有ATG就麻烦了，同时你也要考虑载体ATG与你基因ATG直接的序列。
问题2， 你所谓的GC有多 ...

谢谢啊，确实高GC未必不能扩增，只是可能难度有点高吧！还是决定尝试一下。
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-20 11:18:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-19 21:49:32
不知道你reporter放在N 还是C端。放在N端那么1就有问题，放在C端1就没有问题。
如果放在reporter放在N端，PCR primer 可以设提到终止密码子以后，不影响定位和表达。如果放在C端，直接设计，PCR的时候加DMSO，看是 ...

reporter放在C端。谢谢啊！另外想请教如果reporter放在C端的话，表达蛋白完整编码框（已去除end codon的情况下）与reporter之前有一些序列（3的倍数个碱基）对表达是否有影响？影响如何？
赞一下 回复此楼
5楼2013-08-20 11:21:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
yangjianchen: 金币+2, ★有帮助, 恩，谢谢啊！努力尝试下！ 2013-08-20 16:12:53
引用回帖:
5楼: Originally posted by yangjianchen at 2013-08-20 04:21:47
reporter放在C端。谢谢啊！另外想请教如果reporter放在C端的话，表达蛋白完整编码框（已去除end codon的情况下）与reporter之前有一些序列（3的倍数个碱基）对表达是否有影响？影响如何？...

应该对表达应该影响不大。因为正常构建过程中也会产生相应的序列。比如梅切序列等。
赞一下 回复此楼
Let'sdoit.
6楼2013-08-20 15:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yangjianchen 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕322 +9 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-05 9/450 2026-04-06 07:36 by 小小树2024
[考研] 求调剂 +7 chenxrlkx 2026-04-05 7/350 2026-04-06 07:31 by houyaoxu
[考研] 求调剂 一志愿西南交通大学085701环境工程 282分 +7 多多爱吃汉堡 2026-04-04 7/350 2026-04-05 19:47 by 福农资环_环境基
[考研] 工科08-机械专硕-求调剂 +3 雷欧飞踢 2026-04-02 3/150 2026-04-05 18:49 by 蓝云思雨
[考研] 304求调剂 +3 luoye0105 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:16 by 土木硕士招生
[考研] 295求调剂 +8 FZAC123 2026-04-03 8/400 2026-04-05 17:46 by 蓝云思雨
[考研] 工科08专硕机械275求调剂 +3 AaAa7420 2026-04-02 3/150 2026-04-05 13:26 by jp9609
[考研] 材料化工306分找合适调剂 +14 沧海轻舟e 2026-04-04 14/700 2026-04-05 09:53 by 朱云虎202
[考博] 申博 +7 IQwQl 2026-04-04 7/350 2026-04-04 23:32 by mumin1990
[考研] 能动调剂326专硕 +4 wan112233 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:47 by yu221
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 268求调剂 +8 你好tg 2026-04-03 9/450 2026-04-04 05:08 by gswylq
[考研] 372分材料与化工（085600）一志愿湖南大学求调剂 +3 蓝笺片 2026-04-03 4/200 2026-04-03 17:58 by Jimmyandyou
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-02 9/450 2026-04-03 11:12 by wanwan00
[考研] 复试调剂 +3 bvzz 2026-04-01 3/150 2026-04-03 09:47 by 蓝云思雨
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +15 GENJIOW 2026-03-31 16/800 2026-04-02 17:56 by cyh—315
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-04-01 11/550 2026-04-02 11:31 by lnilvy
[考研] 0805求调剂 +8 是水分 2026-03-31 8/400 2026-04-02 10:46 by guanxin1001
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +8 cs0106 2026-04-01 9/450 2026-04-02 10:36 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿大连理工大学材料求调剂 +6 Gymno 2026-03-30 6/300 2026-03-31 07:26 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭