应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 亚细胞定位。。。
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 2752  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yangjianchen

铜虫 (小有名气)

[求助] 亚细胞定位。。。

请问在构建亚细胞定位载体时，要通过PCR扩增目的基因终止密码子之前的序列用于构建融合蛋白，我有两个问题想请教：
1，ATG（起始密码子）之前的一些序列（约几十bp）连到载体上对结果有没有影响？
2，若终止密码子前的序列GC含量高，二级结构有些复杂，设计引物扩增存在一定的困难，可否有其他解决途径去获得用于够载体的序列？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

学习的

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-19 20:33:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-20 11:31:43
yangjianchen: 金币+3, ★有帮助 2013-08-20 16:13:09
不知道你reporter放在N 还是C端。放在N端那么1就有问题，放在C端1就没有问题。
如果放在reporter放在N端，PCR primer 可以设提到终止密码子以后，不影响定位和表达。如果放在C端，直接设计，PCR的时候加DMSO，看是否可行。
赞一下(1人) 回复此楼
Let'sdoit.
2楼2013-08-19 21:49:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-20 11:31:51
yangjianchen: 金币+5, ★有帮助 2013-08-20 16:13:24
关于问题1，如果你使用载体本身ATG的话就可能有问题，因为你做定位，N端可能存在信号肽，你加入ATG前面序列，而你载体本身也有ATG就麻烦了，同时你也要考虑载体ATG与你基因ATG直接的序列。
问题2， 你所谓的GC有多高？我用过近80%的GC引物，都没有问题。Good luck！
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yangjianchen
互助互励，共奋共进！！
3楼2013-08-19 22:05:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-19 22:05:14
关于问题1，如果你使用载体本身ATG的话就可能有问题，因为你做定位，N端可能存在信号肽，你加入ATG前面序列，而你载体本身也有ATG就麻烦了，同时你也要考虑载体ATG与你基因ATG直接的序列。
问题2， 你所谓的GC有多 ...

谢谢啊，确实高GC未必不能扩增，只是可能难度有点高吧！还是决定尝试一下。
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-20 11:18:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjianchen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-19 21:49:32
不知道你reporter放在N 还是C端。放在N端那么1就有问题，放在C端1就没有问题。
如果放在reporter放在N端，PCR primer 可以设提到终止密码子以后，不影响定位和表达。如果放在C端，直接设计，PCR的时候加DMSO，看是 ...

reporter放在C端。谢谢啊！另外想请教如果reporter放在C端的话，表达蛋白完整编码框（已去除end codon的情况下）与reporter之前有一些序列（3的倍数个碱基）对表达是否有影响？影响如何？
赞一下 回复此楼
5楼2013-08-20 11:21:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
yangjianchen: 金币+2, ★有帮助, 恩，谢谢啊！努力尝试下！ 2013-08-20 16:12:53
引用回帖:
5楼: Originally posted by yangjianchen at 2013-08-20 04:21:47
reporter放在C端。谢谢啊！另外想请教如果reporter放在C端的话，表达蛋白完整编码框（已去除end codon的情况下）与reporter之前有一些序列（3的倍数个碱基）对表达是否有影响？影响如何？...

应该对表达应该影响不大。因为正常构建过程中也会产生相应的序列。比如梅切序列等。
赞一下 回复此楼
Let'sdoit.
6楼2013-08-20 15:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yangjianchen 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 086000生物与医药求调剂 +3 老天眷顾之人 2026-03-31 3/150 2026-04-05 22:24 by syh9288
[考研] 调剂 +3 李广火 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:57 by 蓝云思雨
[考研] 275求调剂 +16 waltzh 2026-04-01 16/800 2026-04-05 17:14 by Hdyxbekcb
[考研] 男生，一志愿沪9生物学071000，初试308求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:26 by barlinike
[考研] 调剂 +8 熊二想上岸 2026-04-04 8/400 2026-04-05 05:27 by houyaoxu
[考研] 求生物学学硕调剂——364分 +7 云朵遛弯指南 2026-04-04 7/350 2026-04-04 22:49 by zhyzzh
[考研] 338求调剂 +4 zzz，，r 2026-04-03 4/200 2026-04-03 16:39 by lijunpoly
[考研] 315求调剂 +6 顺理成张 2026-04-03 8/400 2026-04-03 14:04 by 百灵童888
[硕博家园] 求老师收留 +9 lllq123 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:48 by 呼吸都是减肥
[考研] 321求调剂 +17 y-yh 2026-04-01 20/1000 2026-04-03 12:57 by y-yh
[考研] 286求调剂 +7 Faune 2026-03-30 7/350 2026-04-03 10:14 by linyelide
[考研] 274求调剂 +10 薛定谔的虎。 2026-04-01 10/500 2026-04-03 10:13 by tianyyysss
[考研] 273求调剂 +20 李芷新1 2026-03-31 20/1000 2026-04-03 09:58 by linyelide
[考研] 复试调剂 +3 bvzz 2026-04-01 3/150 2026-04-03 09:47 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿a区211，085601-307分求调剂 +13 党嘉豪 2026-03-31 26/1300 2026-04-03 08:33 by 495374996
[考研] 一志愿华南师范大学-22408计算机-292分-求华南师范大学调剂 +4 爱读书的小鳄鱼 2026-04-02 4/200 2026-04-02 18:35 by 求调剂zz
[考研] 一志愿9初试366 本双非求调剂 +4 运气来得若有似� 2026-04-02 4/200 2026-04-02 09:56 by guanxin1001
[考研] 一志愿北京科技，085601总分305求调剂 +9 半生瓜！ 2026-04-01 11/550 2026-04-02 08:28 by Wang200018
[考研] 070300化学279求调剂 +15 哈哈哈^_^ 2026-03-31 17/850 2026-04-01 21:37 by 给你你注意休息
[考研] 070300化学专业279调剂 +10 哈哈哈^_^ 2026-03-31 10/500 2026-03-31 23:13 by liu823948201
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭