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叮叮0504

新虫 (初入文坛)

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[求助] 【求助/交流】表达载体pCAMBIA1304表达顺序看不懂

怎么有2个35S启动子啊，一个方向向左，一个方向向右，我在多克隆位点上插入了我的目的基因，报告基因GFP和GUS还会表达么，新人在线等，急啊，如果发帖不规范，版主大人大量

1304质粒图

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1楼 2011-11-03 20:11:33

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荒寒落寞

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引用回帖:

6楼: Originally posted by lixg at 2011-11-09 08:32:13:
1.先搞清楚“GFP表达”是什么意思！转录和翻译都可叫做表达。
2.是的，应该将基因插入Nco和SpeI之间。其二，必须将你的基因的ORF与GFP构建成融合蛋白，GFP才能发光。
3.否则（发生移码），即使GFP能够转录，GF ...

总之一句话，没有构建融合蛋白的情况下，GFP和GUS会翻译表达么

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8楼2011-11-09 13:29:17

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liujianmin68

木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 分析得很好！ 2011-11-06 21:53:33

载体图没什么问题。你插入外源基因不会影响gus和gfp的表达，因为这两个基因在启动子后面，没有受到外源基因的影响；但是，你插入外源基因能不能表达要看你载体构建的情况，如果你仅仅转入一个外源基因，理论上是不能表达的，如果你转入的是一个完整的表达框，可能会正常表达。

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转向地质微生物学

2楼2011-11-06 19:35:19

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zzz119

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【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-11-06 21:53:42

两个启动是启动表达两个不同方向的基因，不会影响GUS和GFP的表达，多克隆位点插入的基因在有操纵子的情况下会表达。。。

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3楼2011-11-06 20:50:16

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荒寒落寞

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★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励上图 2011-11-09 12:18:29

引用回帖:

3楼: Originally posted by zzz119 at 2011-11-06 20:50:16:
两个启动是启动表达两个不同方向的基因，不会影响GUS和GFP的表达，多克隆位点插入的基因在有操纵子的情况下会表达。。。

我看有的毕业论文，插入的是多克隆位点NCOI和SPEI之间，不在MCS之间啊
还有载体的左边缘，和右边缘问题，有的载体是左边R-BORDER，这个左边是T-BORDER

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4楼2011-11-09 01:08:05

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