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蜗牛061610

木虫 (小有名气)

1

应助: 2 (幼儿园)
金币: 1829.5
散金: 90
红花: 1
帖子: 70
在线: 42.8小时
虫号: 1149237
注册: 2010-11-17
性别: GG
专业: 微生物遗传育种学

[求助] 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？

有人说如果质粒上两个切点紧挨着的话，双酶切容易切错。我就先用一个酶进行酶切，切完后过pcr纯化试剂盒后用第二个酶进行酶切，再过pcr纯化试剂盒进行酶连。酶连了两批，挑去转化子抽取质粒进行pcr鉴定都是假阳性，搞不清楚是什么原因。

[ 来自科研家族化学生物学 ]

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1

1楼2011-10-09 14:13:32

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冰封之real

银虫 (初入文坛)

应助: 5 (幼儿园)
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性别: GG
专业: 微生物遗传育种学

我以前试过，在没有保护碱基的情况下酶切几乎成功不了，所以如果两个酶切位点紧挨着的话，相当于切开一头另一头就没了保护碱基，恐怕不好切

13楼2014-01-26 09:10:55

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