应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 毕赤酵母表达的蛋白无活性
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 3256  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

兔兔yy070330

铜虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达的蛋白无活性

各位大虾，我用毕赤酵母KM71和GS115表达我的目的基因（1.8K左右，是酶蛋白），培养5天，每天取样侧活，都没有活性，SDS-PAGE能看到微弱的条带。我是用电转的方法将SacⅠ线性化后的重组质粒导入酵母中的，提取酵母基因组做PCR，用AOX3'和AOX5'做引物，以及特异性引物都能扩出目的条带。现在老板催的紧，心理压力大呀。伤不起伤不起。跪求各位大虾给点建议。谢谢了
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化与检测

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-09-05 20:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liurz

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 兔兔yy070330 at 2011-09-05 21:25:46
我做完电转后，用感受态细胞涂MD板，没有长。用线性化的pPIC9K空质粒分别电转GS115、KM71。相同条件下做了诱导表达，我的目的条带是和对照相比的，对照菌在60KD左右没有条带。另外，我的目的蛋白在原始菌中是分泌到 ...

各位大虾，我用毕赤酵母KM71和GS115表达我的目的基因（1.8K左右，是酶蛋白）
你的蛋白到底多大呢？是1.8K还是60Kd?
赞一下 回复此楼
8楼2014-01-08 19:37:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

cexoihtydx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 感谢热心应助~祝顺利！ 2011-09-06 13:49:24
问2个问题：
1 对照组：空载酵母菌株同时诱导表达了吗?电泳的淡淡的目的条带是否是酵母的本底表达？
2 确定酶蛋白是分泌表达吗？否则，就需要超声破碎后，再测活性和跑蛋白胶。
赞一下(1人) 回复此楼
不放弃，日子总有阳光，追求总有希望！
2楼2011-09-05 21:02:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兔兔yy070330

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cexoihtydx at 2011-09-05 21:02:08:
问2个问题：
1 对照组：空载酵母菌株同时诱导表达了吗?电泳的淡淡的目的条带是否是酵母的本底表达？
2 确定酶蛋白是分泌表达吗？否则，就需要超声破碎后，再测活性和跑蛋白胶。

我做完电转后，用感受态细胞涂MD板，没有长。用线性化的pPIC9K空质粒分别电转GS115、KM71。相同条件下做了诱导表达，我的目的条带是和对照相比的，对照菌在60KD左右没有条带。另外，我的目的蛋白在原始菌中是分泌到胞外的，9K也是分泌表达的质粒。
赞一下 回复此楼
3楼2011-09-05 21:25:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soso327

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 感谢您的热心应助! 2011-09-06 13:49:58
很久没做毕赤酵母表达了，以前做过很长一段时间
当时也是电转后，甲醇诱导表达，但是表达时间都在一周以上；
因为菌体生长有个时期，我们一般取生长对数期到稳定期这个阶段的菌群提取蛋白。
还有就是你取样的时候是怎么取的，我们浓缩的时候都特别注意，因为蛋白很容易失活（我们当时好像用的硫酸铵？不太记得额）。希望对你分析有好处~~
赞一下(1人) 回复此楼
人生在于旅程，不在于结果！
4楼2011-09-06 10:18:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 307分材料专业求调剂 +6 Hll胡 2026-04-05 6/300 2026-04-05 18:25 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +7 大火山小火山 2026-04-05 7/350 2026-04-05 18:05 by ms629
[考研] 341求调剂 +3 学无止境，冲 2026-04-05 3/150 2026-04-05 09:40 by lbsjt
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +11 哇呼哼呼哼 2026-04-01 12/600 2026-04-04 23:17 by 永字号
[考研] 本科211 分数293请求调剂 +4 莲菜就是藕吧 2026-04-01 4/200 2026-04-04 22:32 by hemengdong
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 20:49 by 蓝云思雨
[考研] [调剂信息]085408光电信息 求调剂 总分291分数一英一 +3 iz11az 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:09 by 蓝云思雨
[考研] 368求调剂 +5 今华习 2026-04-03 7/350 2026-04-04 18:47 by imissbao
[考研] 22408求调剂 354分 可跨专业 +3 hannnnnnn 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:35 by 土木硕士招生
[考研] 求材料调剂，一志愿郑州大学289分 +15 硕星赴 2026-04-03 15/750 2026-04-04 01:01 by userper
[考研] 求调剂，一志愿北京中医药大学 +3 小小达不溜 2026-04-02 3/150 2026-04-03 22:55 by 冲矢昴星团
[考研] 考研调剂 +5 小sun要好运 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:43 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿华东理工大学，080500学硕，317分，求调剂 +13 s1145 2026-03-31 15/750 2026-04-03 11:44 by msi123
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +19 bradoner 2026-04-01 23/1150 2026-04-03 10:07 by linyelide
[考研] 重庆大学材料与化工085600，初试370+，求求调剂建议 +8 shzhou_ 2026-04-01 9/450 2026-04-03 09:31 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +8 cs0106 2026-04-01 9/450 2026-04-02 10:36 by 不吃魚的貓
[考研] 324求调剂 +5 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 10:16 by sanrepian
[考研] 284求调剂 +12 小熊～～ 2026-03-31 12/600 2026-04-01 20:23 by 花??
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-03-30 13/650 2026-04-01 17:00 by 七度不信任
[考研] 070300化学专业279调剂 +10 哈哈哈^_^ 2026-03-31 10/500 2026-03-31 23:13 by liu823948201
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭