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兔兔yy070330

铜虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母表达的蛋白无活性

各位大虾,我用毕赤酵母KM71和GS115表达我的目的基因(1.8K左右,是酶蛋白),培养5天,每天取样侧活,都没有活性,SDS-PAGE能看到微弱的条带。我是用电转的方法将SacⅠ线性化后的重组质粒导入酵母中的,提取酵母基因组做PCR,用AOX3'和AOX5'做引物,以及特异性引物都能扩出目的条带。现在老板催的紧,心理压力大呀。伤不起伤不起。跪求各位大虾给点建议。谢谢了
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cexoihtydx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 感谢热心应助~祝顺利! 2011-09-06 13:49:24
问2个问题:
1 对照组:空载酵母菌株同时诱导表达了吗?电泳的淡淡的目的条带是否是酵母的本底表达?
2 确定酶蛋白是分泌表达吗?否则,就需要超声破碎后,再测活性和跑蛋白胶。
不放弃,日子总有阳光,追求总有希望!
2楼2011-09-05 21:02:08
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