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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌液PCR验证又失败了
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madengyu

禁虫 (小有名气)
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-08-29 19:20:04
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xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
dhd997(金币+2): 楼主奖励 2011-08-30 07:58:50
dhd997(金币+2): good 2011-08-30 07:58:58
1、你都没有设置阳性对照吗？ 菌液PCR的时候这个很重要，如果阳性正常可以排除PCR体系和程序的问题。
2、你的问题的话，模板量是不是有点少，我是用200ul菌液离心，煮沸10分钟，加25ul灭菌水作为模板，25ul的体系加20ul。
3、另外一个这个退火温度是不是高了，一般是引物Tm值减去5左右。之前这个温度做出来过吗？不确定退火温度的话，不妨做个60-50℃的降落PCR。
赞一下(4人) 回复此楼
生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
5楼2011-08-29 21:45:04
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
直接将内容贴出来以便应助。。。
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-08-29 19:47:49
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主
引用回帖:
2楼: Originally posted by 天使托 at 2011-08-29 19:47:49:
直接将内容贴出来以便应助。。。

我帮他编辑了
回复此楼
如果没有人帮助你，那么你就去帮助别人。
3楼2011-08-29 20:29:27
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liling77ll

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 楼主奖励 2011-08-30 07:58:40
跑菌液不需变性那么久的吧？还有保证菌液活的，感觉你菌液没加进去或者没活性，个人观点，呵呵
赞一下(2人) 回复此楼
做最好的自己，和自己的昨天对比
4楼2011-08-29 21:16:47
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