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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌液PCR验证又失败了
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
madengyu(金币+2): 2011-08-30 07:53:51
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 2011-08-30 07:57:45
首先我想知道的是楼主所要扩增的片段是多大，不过通过你的PCR程序延伸时间可以看出来应该稍微大一点；
没有P出来很正常，关键是要找原因
问题：
1：PCR体系不尽合理，20ul体系中模板和dNTP添加量过多，一般情况下50ul：
taq:1ul
dNTP:1ul
模板:1ul
引物:各1ul
buffer:5ul
可以先变体系做做看看；
2：另外有可能是你的PCR程序不是很合理。。。
3：也有可能你做克隆压根没有连接上，所以PCR肯定没有结果，不过没有做出来PCR不代表没有连接上，可以提取质粒酶切看看结果怎样？

祝你好运！
赞一下(4人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-08-29 22:28:52
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