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madengyu

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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
madengyu(金币+2): 2011-08-30 07:53:51
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 2011-08-30 07:57:45
首先我想知道的是楼主所要扩增的片段是多大,不过通过你的PCR程序延伸时间可以看出来应该稍微大一点;
没有P出来很正常,关键是要找原因
问题:
1:PCR体系不尽合理,20ul体系中模板和dNTP添加量过多,一般情况下50ul:
taq:1ul
dNTP:1ul
模板:1ul
引物:各1ul
buffer:5ul
可以先变体系做做看看;
2:另外有可能是你的PCR程序不是很合理。。。
3:也有可能你做克隆压根没有连接上,所以PCR肯定没有结果,不过没有做出来PCR不代表没有连接上,可以提取质粒酶切看看结果怎样?

祝你好运!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-08-29 22:28:52
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查看全部 16 个回答

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

直接将内容贴出来以便应助。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-08-29 19:47:49
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主

引用回帖:
2楼: Originally posted by 天使托 at 2011-08-29 19:47:49:
直接将内容贴出来以便应助。。。

我帮他编辑了
如果没有人帮助你,那么你就去帮助别人。
3楼2011-08-29 20:29:27
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liling77ll

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 楼主奖励 2011-08-30 07:58:40
跑菌液不需变性那么久的吧?还有保证菌液活的,感觉你菌液没加进去或者没活性,个人观点,呵呵
做最好的自己,和自己的昨天对比
4楼2011-08-29 21:16:47
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